犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究

中国畜牧兽医

犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究

张淑琼^1,2, 高娟¹, 曾思遥¹, 蒋再学¹, 陈瑞爱², 罗满林^1,2

1. 华南农业大学,广东广州 510642;
2. 广东大华农动物保健品股份有限公司研发中心,广东云浮 527300

收稿日期:2012-03-09 出版日期:2012-08-20 发布日期:2012-08-24
通讯作者: 罗满林 E-mail:luoml@scau.edu.cn
作者简介:张淑琼(1986-),女,四川人,硕士生,研究方向:预防兽医学传染病。

The Research of Expression of Optimized Gene of Canine Alpha-Interferon in Pichia pastoris and its Antiviral Activity

ZHANG Shu-qiong^1,2, GAO Juan¹, ZENG Si-yao¹, JIANG Zai-xue¹, CHEN Rui-ai², LUO Man-lin^1,2

1. South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China;
2. Research Center of Guangdong Dahuanong Animal Health Products Co.,Ltd., Yunfu 527300,China

Received:2012-03-09 Online:2012-08-20 Published:2012-08-24

摘要/Abstract

摘要： 本研究根据酵母系统密码子的偏嗜性,对成熟蛋白基因核苷酸序列进行密码子偏嗜性改造,利用毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαC来表达犬IFN-α成熟蛋白基因。并采用非洲绿猴肾细胞(Vero) -水疱性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法为基础来测定重组犬α干扰素的效价,同样方法测定了表达产物对PRV和CDV的抑制作用。本试验实现了犬α干扰素在酵母中的高表达,表达量高达58 mg/L,SDS-PAGE检测大小约为24 ku,比预测分子质量大,推测发生了糖基化。表达产物具有较强的种属特异性,在Vero细胞上对PRV具有较高的抗病毒活性,达到了3.6×10⁷ U/L,对CDV也有很好的抑制作用。本研究为犬IFN-α以后的临床应用研究奠定基础。

关键词: 犬IFN-α 优化基因; 酵母表达; 抗病毒活性

Abstract: According to the yeast system codon partial tropism, modifying the nucleotide sequence of the mature protein co-don,this research used the Pichia pastorios secretion expression vectors pPICZαC to express canine interferon alpha maturedon,this research used the Pichia pastorios secretion expression vectors pPICZαC to express canine interferon alpha mature protein. CaIFN-α was measured by cytopathic effects with Vero-VSV system,the same methods to measure inhibitory effect on PRV and CDV. The results showed that the canine IFN-α got a high expression in yeast. SDS-PAGE showed the protein got 24 ku, larger than the expected size. The CaIFN-α had species specificity, it had a high antiviral activity to PRV on vero cell, reached 3.6 × 10⁷ U/L, and also had a good inhibition to CDV. Its expression got 58 mg/L. The study provided the base for further study of CaIFN-α activity and its clinical application.

Key words: canine IFN-alpha; optimize gene; yeast expression; antiviral activity

中图分类号:

张淑琼, 高娟, 曾思遥, 蒋再学, 陈瑞爱, 罗满林. 犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究[J]. 中国畜牧兽医.

ZHANG Shu-qiong, GAO Juan, ZENG Si-yao, JIANG Zai-xue, CHEN Rui-ai, LUO Man-lin. The Research of Expression of Optimized Gene of Canine Alpha-Interferon in Pichia pastoris and its Antiviral Activity[J]. .

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