Arkadia表达载体转染肾小管上皮细胞条件的优化

中国畜牧兽医

Arkadia表达载体转染肾小管上皮细胞条件的优化

廖芳芳, 李娇, 王惠川, 张中文, 吴国娟

北京农学院动物科学技术学院,北京 102206

收稿日期:2012-01-12 出版日期:2012-08-20 发布日期:2012-08-24
通讯作者: 吴国娟 E-mail:wgj9288@sina.com; zwzhang9288@sina.com
作者简介:廖芳芳(1988—),女,江西人,硕士,主要从事兽医药理学研究。王惠川(1956—),男,河北人,副教授,主要从事中药药理与分子生物学。廖芳芳与王惠川对本文具有同等贡献,并列为第一作者。
基金资助:
北京市自然科学基金项目(6092004、51022014);国家自然科学基金(31172362、30972215);北京市属高校人才强教计划资助项目(PHR)。

Transfection Optimization of Arkadia Expression Vector in Renal Tubular Epithelial Cells

LIAO Fang-fang, LI Jiao, WANG Hui-chuan, ZHANG Zhong-wen, WU Guo-juan

College of Animal Science and Technology, Beijing University of Agriculture,Beijing 102206,China

Received:2012-01-12 Online:2012-08-20 Published:2012-08-24

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在优化泛素化酶Arkadia质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo转染小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)的条件,为研究Arkadia表达载体在小鼠马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephrohathy,AAN)中的作用奠定基础。以小鼠RTECs为转染对象、脂质体Lipofectamine^TM 2000为转染介质,采用Real-time PCR和CCK-8法检测不同的质粒与脂质体比例条件下Arkadia mRNA的表达差异及对细胞活性的影响;同时,用Real-time PCR检测不同的转染时间条件下表达载体对Arkadia mRNA沉默效果的差异。结果显示,Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体的转染效率表现出了一定的剂量和时间依赖性。当质粒DNA∶Lipofectamine^TM 2000为0.66 μg∶2 μL、转染时间为24 h时,对Arkadia mRNA表达的抑制最明显并且对细胞的毒性最小。最终确定了Arkadia-pGPU6/GFP/Neo载体转染小鼠RTECs的最佳条件。

关键词: Arkadia; 表达载体; 转染; 肾小管上皮细胞; 优化

Abstract: To lay the foundation for investigating the role of Arkadia expression vector in mouse aristolochic acid nephropathy (AAN), we optimized the transfection conditions of ubiquitination enzyme Arkadia plasmid expression vector pGPU6/GFP/Neo in mice renal tubular epithelial cells (RTECs). Mice RTECs were taken for transfection object, and liposome Lipofectamine^TM 2000 for transfection medium, we detected the Arkadia mRNA expressions differences and the affects of cell activity under the different ratios conditions of plasmid and liposome by Real-time PCR and CCK-8 assay; at the same time, the differences of Arkadia mRNA expressions silence under the different transfection time conditions by Real-time PCR.The results showed that transfection efficiency of Arkadia-pGPU6/GFP/Neo vector displayed dose and time dependents. When the ratio of plasmid DNA∶Lipofectamine^TM 2000 was 0.66 μg∶2 μL, and the transfection time was 24 h, Arkadia mRNA expression inhibition was very obvious and the cytotoxicity was the lowest.Lastly, we determined the best transfection condition of Arkadia-pGPU6/GFP/Neo vector.

Key words: Arkadia; expression vector; transfection; renal tubular epithelial cells; optimization

中图分类号:

Q813

廖芳芳, 李娇, 王惠川, 张中文, 吴国娟. Arkadia表达载体转染肾小管上皮细胞条件的优化[J]. 中国畜牧兽医.

LIAO Fang-fang, LI Jiao, WANG Hui-chuan, ZHANG Zhong-wen, WU Guo-juan. Transfection Optimization of Arkadia Expression Vector in Renal Tubular Epithelial Cells[J]. .

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