猪细小病毒和猪源脑心肌炎病毒的二重PCR检测方法的建立

中国畜牧兽医

猪细小病毒和猪源脑心肌炎病毒的二重PCR检测方法的建立

朱向博^1,2, 刘业兵², 王晶钰¹, 张晓杰², 梁耀峰², 王利勤¹, 董睿¹, 陈婷¹, 李成山¹

1. 西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100;
2. 中国兽医药品监察所,北京 100081

收稿日期:2012-01-09 出版日期:2012-08-20 发布日期:2012-08-24
通讯作者: 刘业兵 E-mail:liuyebing@ivdc.gov.cn; wangjingyu2004@126.com
作者简介:朱向博(1986－),陕西人,硕士,主要从事动物疫病的分子诊断与防控技术研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31172341,31172349);十一五国家科技支撑计划项目(2007BAD86B04)。

Establishment of a Diplex PCR Assay for Detection of PPV and Porcine EMCV

ZHU Xiang-bo^1,2, LIU Ye-bing², WANG Jing-yu¹, ZHANG Xiao-jie², LIANG Yao-feng², WANG Li-qin¹, DONG Rui¹, CHEN Ting¹, LI Cheng-shan¹

1. College of Veterinary Medicine,Northwest A & F University,Yangling 712100,China;
2. China Institute of Veterinary Drug Control,Beijing 100081,China

Received:2012-01-09 Online:2012-08-20 Published:2012-08-24

摘要/Abstract

摘要： 试验旨在建立能同时检测猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和猪源脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)的二重PCR检测方法。根据GenBank中PPV VP2基因和EMCV 3D基因序列,利用Premier 5.0软件设计出PPV和EMCV的特异性引物。通过优化反应条件,建立了能同时特异性检测PPV和EMCV的二重PCR方法,PPV和EMCV的敏感性检测极限分别达7.62和1.22×10^-1pg/μL。通过对临床36份样品的检测结果表明,该二重PCR检测方法敏感、特异,适合于临床检测应用。

关键词: PPV; EMCV; 猪源脑心肌炎病毒; 二重PCR

Abstract: Establish a diplex PCR assay was to detect porcine parvovirus (PPV) and porcine encephalo myocarditis virus (EMCV) simultaneously.According to PPV VP2 gene sequences and EMCV 3D gene sequences in GenBank, special primers of PPV and EMCV were designed by Premier 5.0 software. Trough optimizing the reaction conditions, a diplex PCR assay,which could detect PPV and EMCV simultaneously,was established. The sensitivity of PPV and EMCV were 7.62 and 1.22×10^-1 pg/μL respectively. Clinical tests of 36 samples showed that the diplex PCR detection assay was sensitive, specific, and suitable for clinical application.

Key words: PPV; EMCV; porcine encephalomyocarditis virus; diplex PCR assay

中图分类号:

S852.65⁺9.2

朱向博, 刘业兵, 王晶钰, 张晓杰, 梁耀峰, 王利勤, 董睿, 陈婷, 李成山. 猪细小病毒和猪源脑心肌炎病毒的二重PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

ZHU Xiang-bo, LIU Ye-bing, WANG Jing-yu, ZHANG Xiao-jie, LIANG Yao-feng, WANG Li-qin, DONG Rui, CHEN Ting, LI Cheng-shan. Establishment of a Diplex PCR Assay for Detection of PPV and Porcine EMCV[J]. .

[1]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[2]	孙盼盼, 侯震, 郝至立, 郑剑纲, 孙娜, 范阔海, 尹伟, 李宏全. 基于网络药理学和分子对接探讨莪术醇抗脑心肌炎病毒的作用机制[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 341-348.
[3]	张鑫杰, 薛少华, 吕紫欣, 黄喜荣, 陈羽璇, 范克伟, 杨小燕, 戴爱玲. 闽粤地区PPV7与PCV2的混合感染调查及PPV7 Cap基因的遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2291-2297.
[4]	韩若婵, 梁瑞英, 左玉柱, 萧飒, 崔尚金. 猪脑心肌炎病毒2A蛋白的原核表达与纯化[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(11): 3454-3459.
[5]	刘胜利, 刘玲玲, 吕玉金, 吴凤笋, 李文刚. 多重PCR结合基因芯片技术检测5种猪繁殖障碍性病毒病方法的研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(5): 1532-1540.
[6]	何莹, 谢芝勋, 罗思思, 李孟, 谢丽基, 邓显文, 谢志勤, 奉彬, 黄娇玲, 张艳芳. 禽流感病毒与鸡细小病毒二重PCR检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(7): 2126-2131.
[7]	张文波, 吴松松, 邓舜洲, 周荷田, 张志庆, 杨丹凤, 曹亮亮. 一种新型仔猪先天性震颤及其病原的初步研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(7): 2147-2154.
[8]	刘立兵, 王建昌, 经美, 王金凤, 袁万哲. 猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3320-3326.
[9]	路超, 张莉, 王利丽, 杨春蕾, 韩伟. 猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二重PCR检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2015, 42(6): 1377-1382.
[10]	赵雪丽, 闫若潜, 吴志明, 曹伟伟, 王淑娟, 谢彩华, 马震原, 周兵强, 王东方. 鉴别猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法的建立和应用[J]. , 2015, 42(4): 865-870.
[11]	赵虹, 谢芝勋, 谢丽基, 刘加波, 邓显文, 谢志勤, 庞耀珊, 范晴, 罗思思. H9亚型禽流感病毒和鸭坦布苏病毒二重PCR检测方法的建立[J]. , 2014, 41(10): 43-47.
[12]	张艳芳, 谢芝勋, 谢丽基, 刘加波, 范晴, 庞耀珊, 邓显文, 谢志勤. 鸭新城疫病毒与番鸭细小病毒二重PCR方法的建立[J]. , 2013, 40(11): 63-66.
[13]	陈安莉, 谢芝勋, 谢丽基, 谢志勤, 庞耀珊, 邓显文, 刘加波, 彭宜, 范晴, 罗思思. 新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测方法的建立及初步应用[J]. , 2013, 40(11): 192-195.
[14]	韩勇. 检测猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒的二重PCR方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2012, 39(9): 89-91.
[15]	施开创, 陈芳芳, 胡丽萍, 屈素洁, 莫胜兰, 郑敏. 猪源脑心肌炎病毒GXLC株对小鼠的致病性试验[J]. 中国畜牧兽医, 2012, 39(8): 179-185.