兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (6): 84-87.

兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究

徐红伟1，臧荣鑫1，杨具田1，卢建雄1，蔡勇2，石来文1，马伟龙1

（1.西北民族大学生命科学与工程学院，兰州 730030； 2.西北民族大学实验中心，兰州 730030）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-06-20 发布日期:2010-06-20
通讯作者: 臧荣鑫

Establishment of the Method for Detecting Lanzhou Fat-tailed Sheep Heart Fatty Acid-binding Proteins (H-FABP) Gene mRNA with Fluorescence Quantitative Ploymerase Chain Reaction

XU Hong-wei1, ZANG Rong-xin1, YANG Ju-tian1, LU Jian-xiong1, CAI Yong2, SHI Lai-wen1, MA Wei-long1

(1.College of Life Science and Engineering of Northwest University for Nationalities,Lanzhou 730030,China;2.Science Experimental Center of Northwest University for Nationalities,Lanzhou 730030,China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-06-20 Published:2010-06-20
Contact: ZANG Rong-xin

摘要/Abstract

摘要： 通过对兰州大尾羊尾部、大网膜、肝脏、肾周脂肪组织中的总RNA提取，反转录获得总cDNA样品，结合PCR技术，建立了SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因mRNA在不同组织中相对表达量的试验方法，并进行批内、批间重复性检验。结果表明，H-FABP和18S基因标准曲线回归方程分别为CtH-FABP =-3.24375x+38.34230和Ct18S=-3.33137x+33.4573，相关系数（r2）分别为0.9964和0.9992，扩增效率分别为103%和99%；批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.8%和10%；说明该方法灵敏度高、特异性强、准确可靠、重复性好，是实时荧光定量PCR检测兰州大尾羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因mRNA表达量的有效方法。

关键词: 兰州大尾羊; 脂肪酸结合蛋白; SYBR GreenⅠ法; 实时荧光定量PCR

Abstract: The method for detecting Lanzhou fat-tailed sheep fatty acid-binding proteins gene mRNA expression with real time PCR was developed. By isolated total RNA form the fresh omentum, kidney weeks adipose tissue, muscle and fat tissue sample using improved the extraction Trizol one step method and reverse transcribed to cDNA using random primers as primer, the results show, the standard curve were CtH-FABP =-3.24375x+38.34230 and Ct18S=-3.33137x+33.4573, had good linear dependence, and it was sensitive and specific. The coefficient of variation values for both intra-experimental and inter-experimental reproducibility ranged less than 1.8% and 10% respectively. The method for detecting Lanzhou fat-tailed sheep H-FABP gene expression with fluorescence quantitative polymerase chain reaction was developed successfully.

Key words: Lanzhou fat-tailed sheep; fatty acid-binding proteins; SYBR Green I method; real time PCR

中图分类号:

徐红伟;臧荣鑫;杨具田;卢建雄;蔡勇;石来文;马伟龙. 兰州大尾羊H-FABP基因荧光定量PCR检测方法的研究[J]. , 2010, 37(6): 84-87.

XU Hong-wei;ZANG Rong-xin;YANG Ju-tian;LU Jian-xiong;CAI Yong;SHI Lai-wen;MA Wei-long. Establishment of the Method for Detecting Lanzhou Fat-tailed Sheep Heart Fatty Acid-binding Proteins (H-FABP) Gene mRNA with Fluorescence Quantitative Ploymerase Chain Reaction[J]. , 2010, 37(6): 84-87.

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