梅花鹿γ干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (5): 85-89.

梅花鹿γ干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

刘颖1,2，王冰1,2，于清龙1,2，熊家军3，杨利国3，陈焕春1,2，郭爱珍1,2

（1.华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070； 2.华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室，武汉 430070； 3.华中农业大学动物科技学院，武汉 430070)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-05-20 发布日期:2010-05-20
通讯作者: 郭爱珍

Stably Expressing Research of Interferongamma (IFNγ) from Cervus Nippon in Different Eukaryotic Cell Lines

LIU Ying1,2, WANG Bing1,2, YU Qinglong1,2, XIONG Jiajun3, YANG Liguo3, CHEN Huanchun1,2, GUO Aizhen1,2

（1.The State Key Laboratory of Agricultural Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China;2.College of Veterinary Medicine, Hubei Provincial Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine, Huazhong AgriculturalUniversity, Wuhan 430070, China; 3.College of Animal Science, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-05-20 Published:2010-05-20

摘要/Abstract

摘要： 提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA，应用RTPCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因，经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCIneo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCIneoCerIFNγ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK21)和牛肾细胞（MDBK）中，在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16 ku，与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。

关键词: 梅花鹿; γ干扰素; 细胞系; 真核表达

Abstract: Total RNA was isolated from Cervus Nippon peripheral blood lymphocytes, which were stimulated with PHA. Then the Cervus Nippon mature IFNγ gene was amplified by reverse transcription chain reaction. The results indicated that the cloned gene was mature Cervus Nippon IFNγ gene, which had the identities of 100% with the CerIFNγ gene published in the GenBank, subcloned into the eukaryotic expression plasmid pCIneo vector which had the CMV enhancer. The recombinant pCIneoCerIFNγ plasmids were transfected into BHK21 cell and MDBK cell by calcium phosphate. The stably expression of transfected cell lines were screened by the G418 resistance. Detected by Western blotting, to determine the relative molecular expression products were 23, 20, 16 ku, it is consistent with the forecast size. This research results lay the foundation for further develop of the Cervus Nippon biological preparations class treatment.

Key words: Cervus Nippon; interferongamma; cell lines; eukaryotic expression

中图分类号:

刘颖;;王冰;;于清龙;;熊家军;杨利国;陈焕春;;郭爱珍;. 梅花鹿γ干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究[J]. , 2010, 37(5): 85-89.

LIU Ying;;WANG Bing;;YU Qinglong;;XIONG Jiajun;YANG Liguo;CHEN Huanchun;;GUO Aizhen;. Stably Expressing Research of Interferongamma (IFNγ) from Cervus Nippon in Different Eukaryotic Cell Lines[J]. , 2010, 37(5): 85-89.

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