猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因RT-LAMP检测方法的建立

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (12): 53-56.

猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因RT-LAMP检测方法的建立

赵彦宗，张显浩，余小利，苏丹萍，贺东生

（华南农业大学兽医学院广东省人畜共患病重点实验室，广州 510642）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-12-20 发布日期:2009-12-20
通讯作者: 贺东生

Establishment of Reverse Transcriptase Loop-mediated Isothermal Amplification for Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus M Gene

ZHAO Yan-zong, ZHANG Xian-hao, YU Xiao-li, SU Dan-ping, HE Dong-sheng

（Guangdong Key Laboratory of Zoonosis, College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-12-20 Published:2009-12-20
Contact: HE Dong-sheng

摘要/Abstract

摘要： 本研究根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)M基因保守序列6个特异性部位设计了 2对引物，建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法。结果表明，该方法灵敏度比RT-PCR高100倍；全部反应可在1 h内完成并可得到其特有的阶梯状条带，而且猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性；在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后，可通过肉眼观察有无荧光而直接判定结果。该方法灵敏度高、特异性好，可作为猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速诊断方法。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒; M基因; 环介导逆转录等温扩增

Abstract: A series of specific primers targeting the 6 distinct sequences of M gene were designed based on the sequences of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) GP6 (M) gene available in GenBank. A reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) for the rapid detection of PRRSV was developed by using the specific primers. The results showed that the detective sensitivity of RT-LAMP method was higher than that of the two-step RT-PCR. The amplification could be accomplished within 1 h with good specificity and high sensitivity, while no product was generated with porcine circovirus, classic swine fever virus and pseudorabies virus. With the addition of SYBR GREENⅠ, the PT-LAMP of PRRSV could be detected by naked eyes.

Key words: porcine reproductive and respiratory syndrome virus; M gene; reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP)

中图分类号:

S852.65

赵彦宗;张显浩;余小利;苏丹萍;贺东生. 猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因RT-LAMP检测方法的建立[J]. , 2009, 36(12): 53-56.

ZHAO Yan-zong;ZHANG Xian-hao;YU Xiao-li;SU Dan-ping;HE Dong-sheng. Establishment of Reverse Transcriptase Loop-mediated Isothermal Amplification for Detection of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus M Gene[J]. , 2009, 36(12): 53-56.

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