多浪绵羊骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及成肌诱导分化

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.11.022

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (11): 2956-2962.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.11.022

多浪绵羊骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及成肌诱导分化

赵谦, 张萍, 李向臣, 关伟军, 浦亚斌, 赵倩君, 马月辉

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

收稿日期:2016-04-01 出版日期:2016-11-20 发布日期:2016-11-18
通讯作者: 赵倩君, 马月辉 E-mail:zhaoqianjun@caas.cn;yuehui.ma@263.net
作者简介:赵谦(1990-),男,四川绵阳人,硕士生,研究方向:功能基因组学,E-mail:zqian90@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31201765）；国家科技基础条件平台家养动物种质资源共享平台

Isolation,Culture,Identification and Myogenic Differentiation of Skeletal Muscle Satellite Cells in Duolang Sheep

ZHAO Qian, ZHANG Ping, LI Xiang-chen, GUAN Wei-jun, PU Ya-bin, ZHAO Qian-jun, MA Yue-hui

Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China

Received:2016-04-01 Online:2016-11-20 Published:2016-11-18

摘要/Abstract

摘要：

为了在体外细胞水平模拟多浪绵羊肌肉生长发育过程，本研究以多浪绵羊为试验动物，采用胶原酶和胰酶两步酶消化法分离多浪绵羊骨骼肌卫星细胞（satellite cells，SCs），并利用差速贴壁的方法纯化分离得到的SCs。利用免疫荧光技术检测SCs标记基因Desmin、Pax7和MyoD1的表达情况，鉴定分离得到的SCs。采用血清撤离的方法诱导SCs向成肌方向分化。通过显微镜观察和成肌分化标记基因肌球蛋白重链（myosin heavy chain，MHC）的免疫荧光，检测肌管的形成情况。通过对SCs标记基因Desmin、Pax7和MyoD1的免疫荧光鉴定，确认本研究成功分离得到多浪绵羊SCs。采用血清撤离的方法诱导SCs成肌分化，显微镜观察和MHC免疫荧光可以明显观察和检测到肌管的形成。本研究对多浪绵羊SCs成功地进行了分离和鉴定，并建立了体外培养条件下多浪绵羊SCs的成肌诱导分化。

关键词: 绵羊; 骨骼肌卫星细胞; 分离培养; 成肌分化

Abstract:

To mimic muscle development of Duolang sheep in vitro,we employed a two-step digestion method to separate satellite cells（SCs）and a differential adhesion method to purify the cells in Duolang sheep.Moreover,observation of microscopic images and immunofluorescence were used for identifying Duolang sheep SCs and its myogenic differentiation.Using immunofluorescence for Desmin,Pax7 and MyoD1 genes,we demonstrated that these marker genes all expressed in the SCs.The SCs formed significant myotubes when the serum was withdrawal from growth media,confirmed by the immunofluorescence for MHC and microscopic images.Taken together,we ssuccessfully isolated SCs and established the myogenic differentiation of SCs.

Key words: sheep; skeletal muscle satellite cell; isolation and culture; myogenic differentiation

中图分类号:

Q813

赵谦, 张萍, 李向臣, 关伟军, 浦亚斌, 赵倩君, 马月辉. 多浪绵羊骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及成肌诱导分化[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(11): 2956-2962.

ZHAO Qian, ZHANG Ping, LI Xiang-chen, GUAN Wei-jun, PU Ya-bin, ZHAO Qian-jun, MA Yue-hui. Isolation,Culture,Identification and Myogenic Differentiation of Skeletal Muscle Satellite Cells in Duolang Sheep[J]. , 2016, 43(11): 2956-2962.

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多浪绵羊骨骼肌卫星细胞的分离培养、鉴定及成肌诱导分化

Isolation,Culture,Identification and Myogenic Differentiation of Skeletal Muscle Satellite Cells in Duolang Sheep

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