鸡传染性贫血病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.04.013

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (4): 859-864.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.04.013

鸡传染性贫血病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

杨丽聪^1,2, 苏霞², 朱瑞豪², 周宏专², 徐福州², 杨兵², 孙继国¹

1. 河北农业大学动物医学院, 保定 071000;
2. 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室, 北京 100097

收稿日期:2014-11-21 出版日期:2015-04-20 发布日期:2015-05-05
通讯作者: 杨兵, 孙继国 E-mail:byang111@yeah.net;sunjiguo2000@aliyun.com
作者简介:杨丽聪(1987-),女,河北衡水人,硕士,研究方向:兽医卫生检验,E-mail:yanglicong2014@163.com
基金资助:
北京市农林科学院青年基金(QNJJ201208)

Development of a SYBR Green Ⅰ Real-time PCR Method for Detection of Chicken Infectious Anemia Virus

YANG Li-cong^1,2, SU Xia², ZHU Rui-hao², ZHOU Hong-zhuan², XU Fu-zhou², YANG Bing², SUN Ji-guo¹

1. College of Veterinary Medicine, Agricultural University of Hebei, Baoding 071000, China;
2. Beijing Key Laboratory for Prevention and Control of Infectious Diseases in Livestock and Poultry, Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing 100097, China

Received:2014-11-21 Online:2015-04-20 Published:2015-05-05

摘要/Abstract

摘要： 为建立鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV)的实时荧光定量PCR检测方法,本试验通过CIAV基因组保守区域设计1对扩增片段大小为180 bp的特异性引物,构建pGM-T-CIAV重组质粒,制备阳性标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验.结果显示,CIAV的Ct阈值与标准品浓度在5.33×10⁸至5.33×10³拷贝/μL间呈良好的线性关系,相关系数R²=0.998,斜率为-3.443,产物Tm值在86 ℃左右.该方法与网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)J亚型、马立克氏病病毒(MDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组均无交叉反应,敏感性为5.33拷贝/μL,比普通PCR高1 000倍,批内和批间重复试验变异系数均小于3%.结果表明,本试验建立的CIAV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法可实现对鸡传染性贫血病的早期诊断及感染程度的定量分析的检测.

关键词: 鸡传染性贫血病毒; 实时荧光定量PCR; SYBR GreenⅠ; 定量分析

Abstract: The aim of this study was to develop a Real-time PCR method for detection of chicken infectious anemia virus (CIAV). According to the CIAV genome conservative area, a pair of specific primers which could amplify about 180 bp fragment was designed. By building the pGM-T-CIAV recombinant plasmid, and preparing positive standard, the SYBR GreenⅠReal-time PCR standard curve was established. At the same time, sensitivity test, specificity test and repeatability test were determined. The results indicated that CIAV Ct threshold had good linear relationship with the standard concentration. The correlation rate and slope were 0.998 and -3.443, respectively. The Tm was about 86 ℃. No cross-reactions were found between REV, ALV J subtype, MDV and IBDV. The sensibility was 5.33 coppies/μL, which was 1 000 times than the traditional PCR. The coefficient of variation value was less than 3%. The CIAV SYBR Green Ⅰ Real-time PCR detection method could be realized on the early diagnosis of the disease and infection degree quantitative analysis of the test.

Key words: chicken infectious anemia virus (CIAV); Real-time PCR; SYBR Green Ⅰ; quantitative analysis

中图分类号:

S852.65

杨丽聪, 苏霞, 朱瑞豪, 周宏专, 徐福州, 杨兵, 孙继国. 鸡传染性贫血病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. , 2015, 42(4): 859-864.

YANG Li-cong, SU Xia, ZHU Rui-hao, ZHOU Hong-zhuan, XU Fu-zhou, YANG Bing, SUN Ji-guo. Development of a SYBR Green Ⅰ Real-time PCR Method for Detection of Chicken Infectious Anemia Virus[J]. , 2015, 42(4): 859-864.

[1]	麻宝艺, 盛陈艳, 刘宏莹, 马青霞, 汪婷婷, 李健明, 时坤, 杜锐, 冷雪. BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2326-2335.
[2]	吕晓楠, 徐立蒲, 张文, 王娜, 曹欢, 王小亮, 王姝, 王静波. 感染鲤浮肿病毒镜鲤的组织病理变化及病毒分布规律研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1077-1084.
[3]	徐义葳, 李丹, 程天印. 褐黄血蜱卵蛋白的鉴定及在卵孵化过程中的量变[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4410-4419.
[4]	张军芳, 孙建富, 孙斌, 唐琳, 王英, 王恩泽, 崔岩, 李强, 严昌国, 李香子. 延边牛PPARγ基因的克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 2695-2704.
[5]	苗曼宁, 郭益文, 胡德宝, 曾雨晗, 李新, 张林林, 丁向彬, 郭宏. MSTN基因编辑牛肌肉转录组测序及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(7): 2271-2281.
[6]	李恒, 字向东. 牦牛跨膜附睾蛋白1基因的克隆及其在卵丘卵母细胞复合体中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1284-1293.
[7]	李建梅, 季正剑, 刘梅, 沈欣悦, 程旭, 俞燕, 戴亚斌. 藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫后免疫相关基因的表达变化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1440-1448.
[8]	陈磊, 袁枫, 贺三刚, 玛依拉, 李文蓉. 绵羊FGF10基因克隆、序列分析及其在毛囊发育中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(2): 425-432.
[9]	戴政列, 朱静静, 陈振宇, 周晓龙, 汪涵, 李向臣, 赵阿勇, 杨松柏. 猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(12): 4382-4390.
[10]	姜懿轩, 王亚玲, 邢珊珊, 宋国华, 许会芬, 李明. 新西兰白兔MSTN基因克隆、生物信息学分析及表达谱构建[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3501-3511.
[11]	李志强, 陶晨雨, 魏奥龙, 贾青. 猪性控精子纯度实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3682-3690.
[12]	王征帆, 朱利塞, 王娟, 李祎云, 向蕊, 应碧云, 王贵平, 贾爱卿, 白挨泉. PDCoV与TGEV双重实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3855-3863.
[13]	李安奇, 蒋蕾, 苏晓彤, 昝林森, 王洪宝. 秦川牛ACTC1基因的表达特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(8): 2359-2367.
[14]	李京徽, 邢思远, 王希彩, 李庆贺, 赵桂苹, 张永宏, 文杰, 刘冉冉. 鸡肌内脂肪沉积相关候选基因筛选[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(6): 1828-1836.
[15]	姜徽, 刘攀, 李媛媛, 刘奎国, 黄锡霞, 刘江卫, 胥磊, 杜建文, 桑扎根, 杨雪梅, 赵番番, 王丹. 新疆褐牛乳房炎抗性相关基因的表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(1): 90-97.

鸡传染性贫血病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

Development of a SYBR Green Ⅰ Real-time PCR Method for Detection of Chicken Infectious Anemia Virus

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