鸭坦布苏病毒可视化RT-LAMP快速检测方法的建立与初步应用

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.11.032

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (11): 3334-3339.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.11.032

鸭坦布苏病毒可视化RT-LAMP快速检测方法的建立与初步应用

吴植¹, 夏文龙¹, 蔡树东¹, 郭长明¹, 袁维峰², 王永娟¹

1. 江苏农牧科技职业学院, 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室, 泰州 225300;
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

收稿日期:2017-07-03 出版日期:2017-11-20 发布日期:2017-11-21
通讯作者: 王永娟 E-mail:43088591@qq.com
作者简介:吴植(1980-),男,江苏盐城人,硕士,讲师,研究方向:兽医微生物与免疫学,E-mail:yzwuzhi@163.com
基金资助:
国家重点研发计划（2017YFD0500905）；江苏省教育厅自然基金面上项目（16KJB230004）；江苏省"六大人才"高峰第十二批培养对象支助项目（NY023）

Establishment and Application of Visual RT-LAMP for Rapid Detection of Duck Tembusu Virus

WU Zhi¹, XIA Wen-long¹, CAI Shu-dong¹, GUO Chang-ming¹, YUAN Wei-feng², WANG Yong-juan¹

1. Jiangsu Key Laboratory for High-Tech Research and Development of Veterinary Biopharmaceuticals, Jiangsu Animal Husbandry and Veterinary College, Taizhou 225300, China;
2. Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China

Received:2017-07-03 Online:2017-11-20 Published:2017-11-21

摘要/Abstract

摘要：

为实现鸭坦布苏病毒（duck tembusu virus，DTMUV）的快速检测，本研究根据GenBank中公布的DTMUV E蛋白基因的高度保守序列设计了1套引物，通过优化反应体系各组分的浓度、反应时间和温度，建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法。结果显示，在最佳条件下甜菜碱对反应体系影响不明显；该方法灵敏度是常规RT-PCR的100倍；只能特异性扩增坦布苏病毒，对于其他常见的禽源病毒无特异性扩增；检测结果可直接通过肉眼观察来判断；对临床74份疑似病料，可检出65份。本试验建立的方法灵敏性高、特异性强，可用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断和流行病学调查。

关键词: 鸭坦布苏病毒(DTMUV); 环介导等温扩增; 可视化; 快速检测

Abstract:

To realize the rapid detection of duck tembusu virus (DTMUV), a set of specific primers was designed according to the highly conserved sequence of DTMUV E protein gene published in GenBank. A sensitive and convenient RT-LAMP amplification method was established by optimizing the concentrations of each component, reaction time and temperature in the reaction system. The results showed that the influence of betaine on the reaction system was not obvious under the optimal conditions. This method was 100 times more sensitive than the conventional RT-PCR. The RT-LAMP method specifically amplified tembusu virus but not other common avian viruses. The results could be differentiated by naked eyes. 74 clinic suspicious samples were tested and 65 of them were positive. These results suggested that the RT-LAMP assay could be used as a method for the diagnosis and detection of clinical cases, and molecular epidemiological investigation of duck tembusu virus disease.

Key words: duck tembusu virus (DTMUV); RT-LAMP; visualization; rapid detection

中图分类号:

S858.32

吴植, 夏文龙, 蔡树东, 郭长明, 袁维峰, 王永娟. 鸭坦布苏病毒可视化RT-LAMP快速检测方法的建立与初步应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3334-3339.

WU Zhi, XIA Wen-long, CAI Shu-dong, GUO Chang-ming, YUAN Wei-feng, WANG Yong-juan. Establishment and Application of Visual RT-LAMP for Rapid Detection of Duck Tembusu Virus[J]. , 2017, 44(11): 3334-3339.

参考文献

[1] Cao Z, Zhang C, Liu Y, et al. Tembusu virus in ducks, China[J].Emerg Infect Dis,2011,17(10):1873-1875.
[2] Yan P, Zhao Y, Zhang X, et al. An infectious disease of ducks caused by a newly emerged Tembusu virus strain in mainland China[J].Virology,2011,417(1):1-8.
[3] Yun T, Zhang D, Ma X, et al. Complete genome sequence of novel flavivirus,duck tembusu virus,isolated from ducks and geese in China[J]. J Virology,2012, 86(6):3406-3407.
[4] Su J, Li S, Hu X, et al. Duck egg-drop syndrome caused by BYD virus, a new Tembusu-related flavivirus[J].PLoS One, 2011, 6(3):e18106.
[5] 赵圆圆,李传峰,王桂军,等. 鸭产蛋下降-死亡综合征的临床诊断与病原的初步鉴定[J].扬州大学学报(农业与生命科学版),2011, 32(3):11-14.
[6] 田浪,冯晓声,郭吉余,等. 禽坦布苏病毒研究进展[J].中国畜牧兽医.2016,43(2):553-558.
[7] 曹贞贞,张存,黄瑜,等. 鸭出血性卵巢炎的初步研究[J]. 中国兽医杂志, 2010, 46(12):3-6.
[8] 李玉峰,马秀丽,于可响,等. 一种从鸭新分离的黄病毒研究初报[J]. 畜牧兽医学报, 2011, 42(6):885-891.
[9] 赖芳芳,陈孝明,张健騑,等. 肉鸭中黄病毒的分离与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2013, 40(2):179-182.
[10] 韩青, 赵丽青, 许美玲, 等. 鸭坦布苏病毒研究进展[J].动物医学进展,2015,36(5):103-106.
[11] 姬希文, 闫丽萍, 颜丕熙, 等. 鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立[J].中国预防兽医学报, 2011,33(8):630-634.
[12] 张帅, 云涛, 崔言顺, 等.鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR检测方法的建立和应用[J].浙江农业学报, 2012,24(1):37-40.
[13] 李国平. 鸭坦布苏病毒RT-PCR诊断方法的建立与应用[J]. 中国畜牧兽医, 2013,40(1):69-72.
[14] 颜丕熙,李国新,李泽君,等. 应用套式RT-PCR快速检测鸭坦布苏病毒[J].中国动物传染病学报, 2011,19(3):34-37.
[15] Yan L, Yan P, Zhou J, et al. Establishing a TaqMan based real-time PCR assay for the rapid detection and quantification of the newly emerged duck Tembusu virus[J].Virol J, 2011, 8:464.
[16] Notomi T, Okayama H, Masubuchi H,et al. Loop-mediated isothermal amplification DNA[J]. Nucleic Acids Res, 2000,28(12):63.
[17] Nagamine K, Hase T, Notomi T. Accelerated reaction by loop-mediated isothermal amplification using loop primers[J]. Molecular and Cellular Probes, 2002, 16(3):223-229.
[18] Nagamine K, Watanabe K, Ohtuka K, et al. Loop-mediated isothermal amplification using a nondenatured template[J]. Clinical Chemistry, 2001, 47(9):1742-1743.
[19] 王永娟,左伟勇,朱善元,等. 鸭呼肠孤病毒的RT-PCR检测方法的建立[J].江苏农业学报, 2016,32(5):1107-1110.
[20] 欧全宾,刁有祥,唐熠,等. 鸭坦布苏病毒E基因环介导等温扩增检测方法的建立与应用[J].中国兽医学报, 2013,33(9):1329-1332.
[21] 韩凯凯,李银,黄欣梅,等. 鹅源坦布病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[J].浙江农业学报, 2014,26(1):29-33.
[22] 江彦增, 朱鸿飞. 非洲猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2009, 36(2):72-74.

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Establishment and Application of Visual RT-LAMP for Rapid Detection of Duck Tembusu Virus

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[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	陈吉敏, 李辉煌, 赖连杰, 杨银华, 杨悦, 林瑞意. 鸭坦布苏病毒检测方法及疫苗研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1329-1339.
[3]	熊陈勇, 尹彦文, 施开创, 李军, 郑敏, 韦显凯, 冯淑萍, 龙凤, 屈素洁, 陆文俊, 周洪槿, 黄海莲, 谢守玉, 黎宗强. 2019-2021年鸭坦布苏病毒广西流行毒株遗传多样性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3099-3111.
[4]	阴雅洁, 梁瑞英, 崔欢, 孟利佳, 倪维玲, 乔思娜, 郭康康, 张博, 李松励, 侯绍华, 董世山. 鸭坦布苏病毒分离鉴定及其囊膜蛋白遗传进化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1497-1506.
[5]	胡瑞瑞, 刘莉, 郭涛, 李雅心, 王小奎, 胡圣伟. 绵羊BMP15基因B2突变可视化检测技术的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(3): 810-817.
[6]	徐云明, 魏利斌, 周弇扬, 李叶辉, 孙智远, 仲思远, 陈爱宁, 郭丽娟, 柳增善, 任洪林. 肺炎克雷伯菌环介导等温扩增技术检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(11): 3003-3010.
[7]	刘文俊, 黄运茂, 阳佑天, 许丹宁, 曹楠, 周德荣, 田允波. 鹅新城疫病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(1): 22-31.
[8]	李丹妮, 黄华, 张婧, 王学生, 顾依雯. 3种β₂-受体激动剂荧光免疫层析试纸条的制备及特性研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(8): 2437-2442.
[9]	陈希文, 汪谦, 尹苗, 李莲, 罗文涛, 杨凤, 郭爱伟, 周杰珑, 王雄清. 猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(6): 1630-1636.
[10]	韩肖亚, 陈冬梅, 王玉莲, 陶燕飞, 董国良, 彭大鹏, 袁宗辉. 几种兽用合成抗菌药基于抗体快速检测技术研究进展[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(6): 1869-1876.
[11]	罗亚坤, 梁琳, 王静, 刘存, 刘琪, 刘畅, 蔺文成, 崔尚金. 猪流行性腹泻病毒环介导等温扩增检测方法的建立及应用[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(2): 344-349.
[12]	刘立兵, 王建昌, 经美, 王金凤, 袁万哲. 猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3320-3326.
[13]	白宇, 张井, 胡景炎, 许永鹏, 王树明. 牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3351-3357.
[14]	倪腾腾, 彭大鹏, 谢书宇, 陈冬梅, 王玉莲, 潘源虎, 陶燕飞, 袁宗辉. 饲料和畜禽产品中阿维菌素类药物快速检测技术研究进展[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(9): 2344-2351.
[15]	杨敏, 王慧党, 于潞, 吴长新, 张辉, 曹旭东, 陈创夫. 环介导等温扩增法检测牛奶中结核分枝杆菌条件的优化[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2016, 43(7): 1688-1693.