小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性研究

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.11.031

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (11): 3327-3333.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.11.031

小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性研究

薛忠, 董淑红, 王善辉

徐州生物工程职业技术学院动物工程系, 徐州 221006

收稿日期:2017-05-23 出版日期:2017-11-20 发布日期:2017-11-21
通讯作者: 王善辉 E-mail:wagnshanhui2015@126.com
作者简介:薛忠(1965-),男,江苏常州人,学士,副教授,研究方向:羊生产技术,E-mail:xznxxuwzhong@sina.com
基金资助:
徐州市科技项目（KC14N0070）

Study on Secretory Expression and Immunogenicity of PPRV F Gene in Insect Cells

XUE Zhong, DONG Shu-hong, WANG Shan-hui

Animal Engineering Department, Xuzhou Vocational College of Bioengineering, Xuzhou 221006, China

Received:2017-05-23 Online:2017-11-20 Published:2017-11-21

摘要/Abstract

摘要：

试验旨在探索利用杆状病毒表达系统分泌表达小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV） F基因蛋白及将其作为亚单位疫苗的应用价值。将PPRV F基因克隆到已插入蜂毒信号肽（melittin）的转移载体pFastBacⅠ中，将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，经抗性及蓝白斑筛选得到含F基因的重组杆状病毒DNA （F-Bacmid），转染提取的F-Bacmid DNA至Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒（F-rBac），应用无血清培养的High Five细胞进行重组蛋白的表达及条件优化。SDS-PAGE结果表明，重组蛋白在重组杆状病毒感染的High Five昆虫细胞中获得分泌表达，并可产生较高浓度的重组蛋白；Western blotting结果显示，重组蛋白可被PPRV的特异性抗体所识别，表明重组蛋白具有反应原性；应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠试验结果显示，该蛋白可刺激小鼠产生较高水平的特异性抗体。本研究成功分泌表达了PPRV F蛋白，该蛋白能够刺激机体产生免疫应答，为小反刍兽疫亚单位疫苗的研制奠定基础。

关键词: PPRV F蛋白; 杆状病毒; 分泌表达; 免疫原性; 保护效果

Abstract:

This study was aimed to explore the use of baculovirus expression system to secrete peste des petits ruminants virus (PPRV) F gene protein and use it as subunit vaccine. The gene fragment encoding F protein of PPRV was cloned into the baculovirus pFastBac Ⅰ transfer vector with a honeybee melittin signal peptide.The constructed F-pFastBac was transformed into Escherichia coli DH10Bac,resulting the recombinant baculovirus DNA (F-Bacmid) which was confirmed by blue-white plaque assay and antibiotic resistance selection.The F-Bacmid was then transfected into Sf9 insect cells by the cellfectin transfection reagent.The recombinant F protein was expressed in High Five cells in the serum-free medium.The SDS-PAGE and Western blotting analysis of recombinant protein showed that the protein could be expressed in insect cells and secreted into the culture medium. For the immunogenicity study,the recombinant protein was then inoculated into BALB/c mice, the results showed that the recombinant protein was able to stimulate B cells to produce special antibodies. In conclusions,the recombinant baculovirus expressing F protein of PPRV were successfully constructed.This study applied a basis for the development of PPRV subunit vaccine.

Key words: PPRV F protein; baculovirs; secretory expression; immunogenicity; protective efficacy

中图分类号:

S852.65

薛忠, 董淑红, 王善辉. 小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3327-3333.

XUE Zhong, DONG Shu-hong, WANG Shan-hui. Study on Secretory Expression and Immunogenicity of PPRV F Gene in Insect Cells[J]. , 2017, 44(11): 3327-3333.

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小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性研究

Study on Secretory Expression and Immunogenicity of PPRV F Gene in Insect Cells

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