《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (6): 1645-1651.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.06.010
翟晓鑫, 高花, 韩勇, 高凤山
收稿日期:
2016-12-06
出版日期:
2017-06-20
发布日期:
2017-06-28
通讯作者:
高凤山
E-mail:gfsh0626@126.com
作者简介:
翟晓鑫(1993-),男,山西晋中人,硕士,研究方向:动物分子免疫学,E-mail:xiaoxinzhai@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金项目:猪源病毒CTL多肽表位与SLA-Ⅰ结晶研究(31172304);国家自然科学基金项目:CRISPR/Cas9技术构建ST2细胞系筛选猪源病毒SLA-Ⅰ限制性CTL表位的研究(31672525);辽宁省教育厅重点实验室项目(LZ2015003)
ZHAI Xiao-xin, GAO Hua, HAN Yong, GAO Feng-shan
Received:
2016-12-06
Online:
2017-06-20
Published:
2017-06-28
摘要:
猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)在猪免疫系统中起递呈抗原作用,对其展开研究可为猪相关传染病的预防提供依据。研究发现,托佩克猪SLA-1-632-TPK基因编码序列发生碱基缺失(距离SLA-1-632-TPK基因5'端632 bp处丢失1个碱基"C"),导致移码突变。为矫正SLA-1-632-TPK基因,设计2对矫正引物,以原重组质粒SLA-1-632-TPK/pMD18-T为模板,利用剪切重叠延伸PCR(splicing overlap extention PCR,SOE-PCR)技术分别扩增SLA-1-632-TPK 5'和3'端,之后进行拼接,最后扩增全序列从而矫正目的基因,并进一步连接pMD19-T Simple载体,通过单菌落PCR筛选阳性克隆并测序,并通过GENETYX version 9.0软件对所测序列进行分析。结果显示,SOE-PCR成功扩增得到5'和3'端片段,大小约为650和590 bp,与理论设计值大小(648和585 bp)接近,经过拼接以后,得到全长约1 200 bp,与理论设计值1 223 bp接近。菌落PCR结果显示,矫正基因成功克隆入pMD19-T Simple载体。序列分析结果显示,托佩克猪SLA-1-632-TPK基因距离5'端632 bp处丢失的碱基"C"得到矫正并正确编码。本研究成功矫正了SLA-1-632-TPK基因,并构建其重组质粒SLA-1-TPK/pMD19-T,为下一步研究SLA-1-TPK蛋白表达和相关功能奠定基础。
中图分类号:
翟晓鑫, 高花, 韩勇, 高凤山. 托佩克猪SLA-1-632-TPK基因的矫正及重组质粒SLA-1-TPK/pMD19-T的构建[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(6): 1645-1651.
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