洱源、怒江猫源弓形虫虫株的分离与鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.038

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (3): 825-830.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.038

洱源、怒江猫源弓形虫虫株的分离与鉴定

李浩欣, 严红亚, 段纲, 项勋, 朱旗, 杨志远, 祖菲, 常华

云南农业大学动物科学技术学院, 昆明 650201

收稿日期:2015-07-14 出版日期:2016-03-20 发布日期:2016-03-30
通讯作者: 常华 E-mail:375845001@qq.com
作者简介:李浩欣(1990-),男,内蒙古五原人,硕士生,研究方向:兽医药理毒理学,E-mail:281957558@qq.com
基金资助:
云南省林业厅野生禽类重大动物疫病监测项目(K2400033);云南省高端人才引进计划项目(A3006886);云南农业大学研究生科技创新项目(2015ykc1);云南省教育厅科学研究基因项目(2015J059)

Isolation and Identification of Toxoplasma gondii Isolates from Cats in Eryuan and Nujiang

LI Hao-xin, YAN Hong-ya, DUAN Gang, XIANG Xun, ZHU Qi, YANG Zhi-yuan, ZU Fei, CHANG Hua

College of Animal Science and Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China

Received:2015-07-14 Online:2016-03-20 Published:2016-03-30

摘要/Abstract

摘要： 为了分离猫源弓形虫,本试验从云南洱源、怒江两地区捕捉18只野猫,取其心脏、肝脏、肺脏、脑组织用盐酸—胃蛋白酶溶液消化处理后,腹腔接种小白鼠,将分离到的弓形虫虫株至少传3代,用特异PCR方法对所分离的虫株进行鉴定。结果表明,从18只野猫的样品中分离出3株弓形虫虫株,用特异性引物对3株虫株进行PCR鉴定,均得到弓形虫的特异性目的条带,测序结果表明所扩增出的DNA片段确为弓形虫核糖体B1基因部分序列。同源性比对分析结果显示分离株与T.gondii B1的同源性为100.0%。将动物组织用盐酸—胃蛋白酶溶液消化处理后腹腔接种小白鼠是一种分离弓形虫虫株较理想的方法,对弓形虫B1基因进行特异性扩增,可以快速地鉴定弓形虫虫株。

关键词: 弓形虫; 野猫; B1基因; PCR鉴定

Abstract: The assay was aimed to isolate Toxoplasma gondii (T.gondii) strains from stray cat in Eryuan and Nujiang of Yunnan province.The cat tissues (heart,liver,lung and brain) were digested by acid pepsin solution,intraperitoneally inoculated in Kunming mice,passaged at least 3 generations,and followed by specific PCR amplification of partial B1 gene using species-specific primers.Three T.gondii isolates were isolated from 18 stray cats,PCR result showed that we got the specific target band,and the sequence result of the specific PCR product showed that it was ribosome B1 gene sequence of T.gondii. Homology comparison analysis showed that the isolates was 100.0% homology with T.gondii B1.The method of inoculation into the mice with the tissues that was digested by acid pepsin solution was an effective way to isolate T.gondii strain from animals,and the specific PCR assay was an accurate method for the rapid identification of T.gondii.

Key words: Toxoplasma gondii; stray cat; B1 gene; PCR identification

中图分类号:

S852.7

李浩欣, 严红亚, 段纲, 项勋, 朱旗, 杨志远, 祖菲, 常华. 洱源、怒江猫源弓形虫虫株的分离与鉴定[J]. , 2016, 43(3): 825-830.

LI Hao-xin, YAN Hong-ya, DUAN Gang, XIANG Xun, ZHU Qi, YANG Zhi-yuan, ZU Fei, CHANG Hua. Isolation and Identification of Toxoplasma gondii Isolates from Cats in Eryuan and Nujiang[J]. , 2016, 43(3): 825-830.

参考文献

[1] 王艳华,王光祥,张德林.分子生物学技术在弓形虫病诊断中应用的研究进展[J].中国畜牧兽医,2007,37(8):726-730.
[2] 刘苗苗,周鹏,朱兴全.弓形虫棒状体蛋白的研究进展[J].中国兽医科学,2008,38(5):443-446.
[3] Dubey J P.Toxoplasmosis——A waterborne zoonosis[J].Vet Parasitol,2004,126(1/2):57-72.
[4] Dubey J P.Refinement of pepsin digestion method for isolation of Toxoplasma gondii from infected tissues[J].Vet Parasitol,1998,74(1):75-77.
[5] Jean M C,Odile C,Sandrine M,et al.Genotyping of the protozoan pathogen Toxoplasma gondii using high-resolution melting analysis of the repeated B1 gene[J].Journal of Microbiological Methods,2011,86(3):357-363.
[6] 任庆娥,周春香,菅复春,等.弓形虫病分子诊断技术研究进展[J].中国畜牧兽医,2009,36(5):66-71
[7] 陈昌源.家养宠物与人群弓形虫感染情况的研究[J].中国人兽共患病杂志,2001,17(1):76-77.
[8] 全国人体重要寄生虫病现状调查办公室.全国人体重要寄生虫病现状调查报告[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2005,23(5增刊):332-340.
[9] Xiao Y,Yin J G,Jiang N,et al.Seroepidemiology of human Toxoplasma gondii infection in China[J].BMC Infect Dis,2010,10:4.
[10] 张居作,陈汉忠,徐君飞.我国弓形虫的感染现状[J].动物医学进展,2008,29(7):101-104.
[11] 李祥瑞.弓形虫病流行的新趋势[J].动物医学进展,2010,31(S):234-236.
[12] 夏爱娣,顾允中,徐世杰,等.弓形虫基因组文库的建立,特异克隆的筛选和弓形虫病的DNA诊断[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,1990,8(3):165-169.
[13] 陈观今,卫相才.地高辛素标记弓形虫DNA探针的制备及在产前诊断的应用[J].中国人兽共患病杂志,1995,11(5):7-9.
[14] 李爽,甘绍伯,彭瑞云,等.原位PCR对弓形虫感染鼠病理检测效果的观察[J].中国人兽共患病杂志,2000,16(3):41-43.
[15] 马玉燕,牟瑞丽,王磊一,等.应用荧光定量聚合酶链反应技术诊断胎儿弓形虫感染[J].中华妇产科杂志,2003,38(1):8-10.
[16] 谢德华,朱兴全,崔焕粦,等.猪弓形虫病特异PCR诊断方法的建立[J].中国兽医科技,2005,35(4):289-293.
[17] 李昕,邸宝华,李会强,等.胶体金免疫层析法检测弓形虫循环抗原的研究[J].中国卫生检验杂志,2006,16(2):149-151.
[18] 李健,杨秀珍,梁东春,等.PCR-ELISA检测弓形虫实验研究[J].中国人兽共患病学报,2006,22(4):355-359.
[19] 李辉,许汴利,邓艳,等.弓形虫抗原检测方法的研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2006,24(1):67-69.
[20] Mahalakshmi B,Therese K L,Madhavan H N,et al.Diagnostic value of specific local antibody production and nucleic acid amplification technique-nested polymerase chain reaction (nPCR) in clinically suspected ocular toxoplasmosis[J].Ocul lmmunol Inflamm,2006,14(2):105-112.
[21] Mahittikorn A,Wickert H,Sukthana Y. Toxoplasma gondii:Simple duplex RT-PCR assay for detecting SAG1 and BAG1 genes during stage conversion in immunosuppressed mice[J].Exp Parasitol,2010,124(2):225-231.
[22] Dubey J P,Graham D H,Dahl E,et al.Isolation and molecular characterization of Toxoplasma gondii from chickens and ducks from Egypt[J].Vet Parasitol,2003,114(2):89-95.
[23] Dubey J P,Graham D H,Silva D S,et al. Toxoplasma gondii isolates of free-ranging chickens from Rio de Janeiro,Brazil:Mouse mortality,genotype,and oocyst shedding by cats[J].J Parasitol,2003,89(4):851-853.
[24] Dubey J P,Gomez-Marin J E,Bedoya A,et al.Genetic and biologic characteristics of Toxoplasma gondii isolates in free-range chickens from Colombia,South America[J].Vet Parasitol,2005,134(1-2):67-72.
[25] Dubey J P,Su C,Oliveira J,et al.Biologic and genetic characteristics of Toxoplasma gondii isolates in free-range chickens from Costa Rica,Central America[J].Vet Parasitol,2006,139(1-3):29-36.

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Isolation and Identification of Toxoplasma gondii Isolates from Cats in Eryuan and Nujiang

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[1]	郭长明, 陈怀君, 朱善元, 袁敬知, 葛强, 李珣, 王晓晔. 广西某猪场猪链球菌分离鉴定及其生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(2): 736-746.
[2]	陆杏蓉, 段安琴, 马小娅, 梁莎莎, 邓廷贤. 水牛HSD17B1基因启动子荧光素酶报告基因载体构建与分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3512-3521.
[3]	姚娜, 龚静芝, 范益敏, 仰彬, 陶建平, 黄思扬. 弓形虫病治疗药物的研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(4): 1250-1257.
[4]	薛俊欣, 熊炜, 张强, 黄忠荣, 李树清, 李春阳, 赵新宇, 李健, 王权. 4种有机溶剂对Vero细胞活力和弓形虫增殖的影响[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(8): 2265-2272.
[5]	陈凯, 王金磊, 白梦捷, 杨文彬, 黄思扬. 弓形虫MORN2基因敲除株的构建及其表型鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(9): 2386-2393.
[6]	何帅, 周春雪, 朱兴全, 周东辉, 徐前明. 弓形虫不同发育时期棒状体颈部蛋白5基因的表达研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(2): 350-356.
[7]	朱鹏, 庞春英, 邓廷贤, 段安琴, 陆杏蓉, 陈明棠, 杨炳壮, 梁贤威. 水牛HSD17B1基因克隆分析及其真核表达载体构建[J]. , 2016, 43(3): 559-567.
[8]	徐晓佩, 刘文阁, 张念章, 陈佳, 周东辉, 朱兴全, 徐前明. 刚地弓形虫GRA25基因的克隆及序列分析[J]. , 2016, 43(3): 650-655.
[9]	李航, 姜利建, 刘晋宇, 兰岚, 凌芳芳, 石甜甜, 张贺洋, 贾立军. 新孢子虫与弓形虫交叉抗原AMA1基因重组腺病毒的构建及免疫应答分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(12): 3336-3342.
[10]	王娜, 刘彦双, 刘宁, 金超, 张喜路, 金月, 薛书江. VP22与EGFP、3种弓形虫抗原融合表达重组质粒的构建与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(11): 2859-2865.
[11]	胡玲英, 张念章, 高琦, 朱兴全, 王寿昆. 弓形虫细胞核因子3基因的克隆及序列分析[J]. , 2015, 42(2): 270-274.
[12]	高琦，张念章，胡玲英，周东辉，朱兴全，翁亚彪. 弓形虫DOC2基因C-端的克隆及序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(8): 56-60.
[13]	贾艳，陈玉环，杨丽娜，刘跃生. 犬弓形虫抗体间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 90-94.
[14]	田维鹏，张念章，高琦，鲁力，朱兴全，宋铭忻. 弓形虫胚层发育相关蛋白的原核表达及免疫原性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(4): 27-31.
[15]	杨铭伟, 李迪, 赵海龙, 剡根强, 王静梅. 致犊牛肺炎牛支原体南疆株的分离鉴定及oppF基因序列分析[J]. , 2014, 41(12): 25-29.