VP22与EGFP、3种弓形虫抗原融合表达重组质粒的构建与鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.11.008

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (11): 2859-2865.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.11.008

VP22与EGFP、3种弓形虫抗原融合表达重组质粒的构建与鉴定

王娜^1,2, 刘彦双³, 刘宁⁴, 金超⁵, 张喜路², 金月², 薛书江¹

1. 延边大学农学院, 延吉 133002;
2. 龙井市畜牧站, 龙井 133400;
3. 龙井市畜牧业管理局, 龙井 133400;
4. 梅河口市畜牧总站, 梅河口 135000;
5. 大连市金州新区动物卫生监督所, 大连 116100

收稿日期:2016-03-25 出版日期:2016-11-20 发布日期:2016-11-18
通讯作者: 薛书江 E-mail:sjxue@ybu.edu.cn
作者简介:王娜(1984-),女,吉林临江人,硕士,兽医师,研究方向:动物寄生虫学,E-mail:wangnaperfect@163.com
基金资助:
国家自然基金（31460657）；吉林省科技厅青年科研基金（20150520129JH）

Construction and Identification of Cell Penetrating Peptides VP22 Gene Fused with Enhanced Green Fluorescent Protein and Three Antigens of Toxoplasma gondii

WANG Na^1,2, LIU Yan-shuang³, LIU Ning⁴, JIN Chao⁵, ZHANG Xi-lu², JIN Yue², XUE Shu-jiang¹

1. Agricultural College, Yanbian University, Yanji 133002, China;
2. Longjing Animal Husbandry Station, Longjing 133400, China;
3. Longjing Livestock Authority, Longjing 133400, China;
4. Meihekou Animal Husbandry Station, Meihekou 135000, China;
5. Dalian Jinzhou New Area District Animal Health Supervision, Dalian 116100, China

Received:2016-03-25 Online:2016-11-20 Published:2016-11-18

摘要/Abstract

摘要：

为了探索新型弓形虫疫苗的传递系统，本试验分别构建了细胞渗透肽VP22与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合表达的重组质粒（pcDNA-VP22-EGFP），以及细胞渗透肽VP22与3种弓形虫抗原融合表达的重组质粒（pcDNA-VP22-SAG1、pcDNA-VP22-GRA4、pcDNA-VP22-AMA1）。经PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定后，将重组质粒pcDNA-VP22-EGFP转染COS7细胞，通过荧光显微镜和RT-PCR检测，验证VP22-EGFP基因在COS7细胞中的表达情况。PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定结果显示所有重组质粒均构建正确。转染72 h后的细胞，在荧光显微镜下成功观察到绿色荧光。RT-PCR扩增得到了大小为1 449 bp的目的条带，与预期结果一致。结果表明，重组质粒构建成功。

关键词: 细胞渗透肽VP22; 弓形虫; 真核表达

Abstract:

To study a novel vaccine of Toxoplasma gondii,the recombinant plasmids that cell penetrating peptides VP22 gene fused with one enhanced green fluorescent protein（EGFP)(pcDNA-VP22-EGFP)and three antigens of T.gondii（pcDNA-VP22-SAG1,pcDNA-VP22-GRA4 and pcDNA-VP22-AMA1）were constructed,respectively.The recombinant plasmids were identified by PCR,restriction endonuclease digestion and DNA sequencing.The pcDNA-VP22-EGFP plasmid was transfected into COS7 cells,and the expression of VP22-EGFP in COS7 cells was confirmed by fluorescence microscope and RT-PCR.The results showed that all recombinant plasmid were constructed correctly.Green fluorescence was observed successfully under the fluorescence microscope in transfected cells after 72 h.The gene fragment of 1 449 bp was obtained by RT-PCR.The results indicated that the recombinant plasmids were constructed successfully.

Key words: cell penetrating peptides VP22; Toxoplasma gondii; eukaryotic expression

中图分类号:

王娜, 刘彦双, 刘宁, 金超, 张喜路, 金月, 薛书江. VP22与EGFP、3种弓形虫抗原融合表达重组质粒的构建与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(11): 2859-2865.

WANG Na, LIU Yan-shuang, LIU Ning, JIN Chao, ZHANG Xi-lu, JIN Yue, XUE Shu-jiang. Construction and Identification of Cell Penetrating Peptides VP22 Gene Fused with Enhanced Green Fluorescent Protein and Three Antigens of Toxoplasma gondii[J]. , 2016, 43(11): 2859-2865.

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VP22与EGFP、3种弓形虫抗原融合表达重组质粒的构建与鉴定

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