猪链球菌rGDH蛋白原核表达载体的构建及免疫原性分析

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.012

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (10): 2594-2599.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.012

猪链球菌rGDH蛋白原核表达载体的构建及免疫原性分析

李书光^1,2, 张娜², 程立坤², 苗立中², 刘吉山^1,2, 杨立芳², 沈志强^1,2

1. 山东省滨州畜牧兽医研究院, 滨州 256600;
2. 山东绿都生物科技有限公司, 滨州 256600

收稿日期:2015-01-12 出版日期:2015-10-20 发布日期:2015-10-23
通讯作者: 沈志强 E-mail:bzshenzq@163.com
作者简介:李书光(1982-),男,山东惠民人,博士生,助理研究员,研究方向:预防兽医学,E-mail:lshug@163.com;张娜(1984-),女,山东新泰人,硕士,助理研究员,研究方向:预防兽医学,E-mail:zhangna_jl@163.com
基金资助:
山东省自然科学基金青年基金项目(ZR2014CQ009);滨州市科技发展计划项目(2013GG0304);山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队(SDAIT-06-011-14)

Construction and Immunogenicity Analysis of Streptococcus suis rGDH Prokaryotic Expression Vector

LI Shu-guang^1,2, ZHANG Na², CHENG Li-kun², MIAO Li-zhong², LIU Ji-shan^1,2, YANG Li-fang², SHEN Zhi-qiang^1,2

1. Shandong Binzhou Animal Science & Veterinary Medicine Academy, Binzhou 256600, China;
2. Shandong Lvdu Bio-technology Company Limited, Binzhou 256600, China

Received:2015-01-12 Online:2015-10-20 Published:2015-10-23

摘要/Abstract

摘要： 谷氨酸脱氢酶(GDH)在猪链球菌35个血清型中都存在,是一种具有免疫原性的保护性抗原。本试验PCR扩增出GDH基因,酶切定向插入pET-32a中构建表达载体pET-32a-GDH,将其转化E.coli BL21(DE3)表达菌中,培养并诱导表达rGDH蛋白,产物纯化后免疫新西兰白兔,免疫攻毒保护试验检验该蛋白的免疫原性。PCR试验获得约1 300 bp的GDH基因,双酶切pET-32a-GDH表达载体获得5.4和1.3 kb的片段,IPTG诱导表达获得融合蛋白,免疫保护结果达到70%。结果表明,本试验成功构建表达猪链球菌GDH蛋白的原核表达载体pET-32a-GDH,rGDH蛋白以蜂胶为佐剂免疫模型动物后,免疫保护率达到70%,为猪链球菌亚单位疫苗的研制提供了技术支持。

关键词: 猪链球菌; 谷氨酸脱氢酶(GDH); 原核表达; 免疫原性

Abstract: Glutamate dehydrogenase (GDH) which exists in 35 serotypes of Streptococcus suis,is an immunogenic protective antigen.Therefore,the GDH gene was amplified by PCR method,and the GDH gene PCR fragment was inserted oriented to pET-32a to construct a new recombinant expression vector pET-32a-GDH.The E.coli BL21(DE3)(pET-32a-GDH) was cultured and induced to express the rGDH protein.New Zealand White rabbits were immunized by the purified rGDH protein for immunity protective test to determine the immunogenicity of the protein.The results showed that the recombinant expression vector pET-32a-GDH was successfully constructed,and the rGDH protein was efficiently and solubly expressed.70% of model animals immuned by the rGDH protein with propolis as adjuvant were protected after injection of Streptococcus suis type 2 as a virulent pathogen.The experiment results provided technical support for the development of subunit vaccine of Streptococcus suis.

Key words: Streptococcus suis; glutamate dehydrogenase (GDH); prokaryotic expression; immunogenicity

中图分类号:

Q786

李书光, 张娜, 程立坤, 苗立中, 刘吉山, 杨立芳, 沈志强. 猪链球菌rGDH蛋白原核表达载体的构建及免疫原性分析[J]. , 2015, 42(10): 2594-2599.

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猪链球菌rGDH蛋白原核表达载体的构建及免疫原性分析

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