鸭痘病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.007

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (10): 2560-2566.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.007

鸭痘病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

曹慧慧¹, 孙文超¹, 郑敏², 韦显凯², 苏姣秀², 梁晟², 郑列丰², 李军², 刘棋²

1. 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530001;
2. 广西动物疫病预防控制中心, 南宁 530001

收稿日期:2015-05-15 出版日期:2015-10-20 发布日期:2015-10-23
通讯作者: 郑敏 E-mail:zhgmn26@163.com
作者简介:曹慧慧(1989-),女,广西南宁人,硕士生,研究方向:动物分子病毒学,E-mail:15296586163@163.com
基金资助:
国家自然科学基金(31360601);广西科学基金(2012GXNSFAA053073、2013GXNSFBB053006);广西水产畜牧兽医局科技项目(GYMK1204936)

Establishment of TaqMan Real-time PCR Method for Detection of Duck Poxvirus

CAO Hui-hui¹, SUN Wen-chao¹, ZHENG Min², WEI Xian-kai², SU Jiao-xiu², LIANG Sheng², ZHENG Lie-feng², LI Jun², LIU Qi²

1. College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning 530001, China;
2. Guangxi Center for Animal Disease Control and Prevention, Nanning 530001, China

Received:2015-05-15 Online:2015-10-20 Published:2015-10-23

摘要/Abstract

摘要： 为建立检测鸭痘病毒的TaqMan荧光定量PCR方法,本试验克隆了鸭痘病毒P4b基因,构建重组质粒pMD-DPV-P4b,并将其作为标准阳性模板。参照GenBank收录的禽痘病毒P4b基因设计合成1对特异性引物及与该引物相匹配的特异探针。以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-DPV-P4b为标准品,通过对反应条件进行优化,建立了一种检测鸭痘病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法与禽流感病毒、鸭黄病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒和小鹅瘟病毒等其他水禽病毒,以及山羊痘病毒和鸡痘病毒等其他痘病毒均无交叉反应,特异性好。该方法最低检测限为1.29×10²拷贝/μL,比普通PCR检测方法高100倍。组内和组间变异系数均小于2%。结果表明,本试验所建立方法具有灵敏、特异、安全、快速的特点,适用于鸭痘病毒的检测。

关键词: 鸭痘病毒; 禽痘病毒; 荧光定量PCR; TaqMan探针

Abstract: To establishment a TaqMan Real-time PCR method for detection of duck poxvirus (DPV),we cloned the P4b gene of DPV.The specific primers and probe were designed according to the nucleotide sequence of avipoxvirus available in GenBank.Recombinant plasmid pMD-DPV-P4b was employed as positive standard template for Real-time PCR.By optimization of reaction conditions,a TaqMan Real-time PCR method for detection of DPV was established.The results of specificity test proved this method had no cross-react with other waterfowl vial agents and poxviruses including avian influenza virus,duck flavivirus,duck hepatitis virus,Newcastle disease virus,duck entertitis virus,goose parvovirus,goatpox virus and fowlpox virus.The detection limit of the assay was 1.29×10² copies/μL of viral DNA,which was 100 times higher than that of the routine PCR.Reproducibility test showed that the CVs of intra assay and inter assay were both less than 2%.Above results supported that the assay was suitable for the detection of DPV very well.

Key words: duck poxvirus; avipoxvirus; Real-time PCR; TaqMan probe

中图分类号:

S852.65

曹慧慧, 孙文超, 郑敏, 韦显凯, 苏姣秀, 梁晟, 郑列丰, 李军, 刘棋. 鸭痘病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J]. , 2015, 42(10): 2560-2566.

CAO Hui-hui, SUN Wen-chao, ZHENG Min, WEI Xian-kai, SU Jiao-xiu, LIANG Sheng, ZHENG Lie-feng, LI Jun, LIU Qi. Establishment of TaqMan Real-time PCR Method for Detection of Duck Poxvirus[J]. , 2015, 42(10): 2560-2566.

[1]	麻宝艺, 盛陈艳, 刘宏莹, 马青霞, 汪婷婷, 李健明, 时坤, 杜锐, 冷雪. BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2326-2335.
[2]	吕晓楠, 徐立蒲, 张文, 王娜, 曹欢, 王小亮, 王姝, 王静波. 感染鲤浮肿病毒镜鲤的组织病理变化及病毒分布规律研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1077-1084.
[3]	张军芳, 孙建富, 孙斌, 唐琳, 王英, 王恩泽, 崔岩, 李强, 严昌国, 李香子. 延边牛PPARγ基因的克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 2695-2704.
[4]	苗曼宁, 郭益文, 胡德宝, 曾雨晗, 李新, 张林林, 丁向彬, 郭宏. MSTN基因编辑牛肌肉转录组测序及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(7): 2271-2281.
[5]	李恒, 字向东. 牦牛跨膜附睾蛋白1基因的克隆及其在卵丘卵母细胞复合体中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1284-1293.
[6]	李建梅, 季正剑, 刘梅, 沈欣悦, 程旭, 俞燕, 戴亚斌. 藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫后免疫相关基因的表达变化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1440-1448.
[7]	陈磊, 袁枫, 贺三刚, 玛依拉, 李文蓉. 绵羊FGF10基因克隆、序列分析及其在毛囊发育中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(2): 425-432.
[8]	戴政列, 朱静静, 陈振宇, 周晓龙, 汪涵, 李向臣, 赵阿勇, 杨松柏. 猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(12): 4382-4390.
[9]	姜懿轩, 王亚玲, 邢珊珊, 宋国华, 许会芬, 李明. 新西兰白兔MSTN基因克隆、生物信息学分析及表达谱构建[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3501-3511.
[10]	李志强, 陶晨雨, 魏奥龙, 贾青. 猪性控精子纯度实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3682-3690.
[11]	王征帆, 朱利塞, 王娟, 李祎云, 向蕊, 应碧云, 王贵平, 贾爱卿, 白挨泉. PDCoV与TGEV双重实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3855-3863.
[12]	李安奇, 蒋蕾, 苏晓彤, 昝林森, 王洪宝. 秦川牛ACTC1基因的表达特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(8): 2359-2367.
[13]	李京徽, 邢思远, 王希彩, 李庆贺, 赵桂苹, 张永宏, 文杰, 刘冉冉. 鸡肌内脂肪沉积相关候选基因筛选[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(6): 1828-1836.
[14]	姜徽, 刘攀, 李媛媛, 刘奎国, 黄锡霞, 刘江卫, 胥磊, 杜建文, 桑扎根, 杨雪梅, 赵番番, 王丹. 新疆褐牛乳房炎抗性相关基因的表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(1): 90-97.
[15]	张继, 易鸣, 程朝友, 程均华, 付正仙, 杨德文, 吴雪, 邱淦远, 刘若余. 威宁绵羊SOCS7和GFAP基因组织表达研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(7): 1899-1906.

鸭痘病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

Establishment of TaqMan Real-time PCR Method for Detection of Duck Poxvirus

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