猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.07.008

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (7): 1674-1679.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.07.008

猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备

梁武^1,2,3, 孙艳^2,3, 吕茂杰^2,3, 李建丽^2,3, 杨保收^2,3, 乔健¹

1. 中国农业大学动物医学院, 北京 100193;
2. 天津瑞普生物技术股份有限公司瑞普生物研究院, 天津 300308;
3. 农业部生物兽药创制重点实验室, 天津 300308

收稿日期:2014-11-05 出版日期:2015-07-20 发布日期:2015-07-23
通讯作者: 杨保收, 乔健 E-mail:bsyang@ringpu.com;qiaojian@cau.edu.cn
作者简介:梁武(1968-),男,天津人,博士,高级兽医师,研究方向:兽用疫苗的研究与开发,E-mail:sales@ringpu.com;孙艳(1986-),女,山东淄博人,硕士,研究方向:猪病毒性疫苗的研究与开发,E-mail:sunyan5882006@126.com
基金资助:
瑞普生物研究院猪圆环病毒疫苗专项基金项目

Preparation of Monoclonal Antibodies against Porcine Circovirus Type 2 Cap Protein

LIANG Wu^1,2,3, SUN Yan^2,3, LV Mao-jie^2,3, LI Jian-li^2,3, YANG Bao-shou^2,3, QIAO Jian¹

1. College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China;
2. Ringpu Biological Research Institute, Tianjin Ringpu Biotechnology Co., Ltd., Tianjin 300308, China;
3. Key Laboratory of Biogenic Veterinary Drugs Innovation, Ministry of Agriculture, Tianjin 300308, China

Received:2014-11-05 Online:2015-07-20 Published:2015-07-23

摘要/Abstract

摘要： 本研究利用已构建的基因工程重组菌表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)ORF2编码的Cap蛋白,纯化后作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。经间接免疫荧光试验(IFA)筛选及有限稀释法进行3次亚克隆后,本试验最终获得5株稳定分泌抗PCV2 Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3D12、4D5、4B9、4C9和4G10。其中4D5为IgG2b亚型,其余4株单克隆抗体均为IgG1亚型,轻链类型均为κ。Western blotting鉴定结果表明获得的5株单克隆抗体均不能特异性的识别47 ku重组PCV2 Cap蛋白;对病毒感染细胞进行IFA试验,结果显示5株单克隆抗体均特异性的识别病毒抗原,表明5株单克隆抗体识别的抗原表位均为构象表位。中和试验结果表明,5株单克隆抗体均有中和活性。本试验结果为进一步探索ORF2基因的结构、功能及建立快速准确的诊断方法奠定了基础。

关键词: 猪圆环病毒2型; 融合蛋白; 单克隆抗体

Abstract: The structural protein Cap encoded by ORF2 of porcine circovirus type 2 (PCV2) was expressed in genetic engineering recombinant bacteria and used as the immunogen after purification.Five hybridoma cell lines against PCV2 Cap protein named as 3D12,4D5,4B9,4C9 and 4G10,respectively,were developed after fusion between SP2/0 myeloma cells and spleen cells of BALB/c mice immunized with purified recombinant PCV2 Cap protein.Except the heavy chain type of 4D5 was identified as IgG2b,others were identified as IgG1;The light chains were all kappa.In Western blotting assay,all the monoclonal antibodies (mAbs) couldn't specifically recognize the 47 ku recombinant PCV2 Cap protein,but showed strong specific fluorescence in PCV2 infected PK15 cells in IFA,which indicated that all the mAbs recognized comformational epitope.The neutralization test showed that all the mAbs had neutralization activity.These results laid the foundation for further study of the structure and function of PCV2 ORF2 gene,and establishment of the method for diagnosing PCV2 rapidly and exactly.

Key words: porcine circovirus type 2 (PCV2); recombinant protein; monoclonal antibodies

中图分类号:

梁武, 孙艳, 吕茂杰, 李建丽, 杨保收, 乔健. 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备[J]. , 2015, 42(7): 1674-1679.

LIANG Wu, SUN Yan, LV Mao-jie, LI Jian-li, YANG Bao-shou, QIAO Jian. Preparation of Monoclonal Antibodies against Porcine Circovirus Type 2 Cap Protein[J]. , 2015, 42(7): 1674-1679.

参考文献

[1] Meehan B M,McNeilly F,Todd D,et al.Characterization of novel circovirus DNAs associated with wasting syndromes in pigs[J]. J Gen Virol,1998,79(9):2171-2179.
[2] Clark E G.Post-weaning multisystemic wasting syndrome[J]. Proc Am Assoc Swine Pract,1997,175:499-501.
[3] Harding J C S,Clark E G.Recognizing and diagnosing post weaning multi systemic wasting syndrome (PMWS)[J].Swine Health Prod,1997,5(5):201-203.
[4] 王忠田,杨汉春,郭鑫.规模化猪场PCV2感染的流行病学调查[J].中国兽医杂志,2002,38(10):3-6.
[5] López-Soria S,Nofrarías M,Calsamiglia M,et al.Post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) clinical expression under field conditions is modulated by the pig genetic background[J].Vet Microbiol,2011,149(3-4):352-357.
[6] 乔翠,高凤山,许崇波.猪圆环病毒2型分子致病机理及相关疾病研究进展[J].中国畜牧兽医,2012,39(2):170-173.
[7] Mankertz A,Mankertz T,Wolf K,et al.Identification of a protein essential for replication of porcine circovirus[J].J Gen Virol,1998,79(2):381-384.
[8] Hamel A L,Lin L L,Nayar G P,et al.Nucleotide sequence of porcine circovirus associated with post weaning multisystemic wasting syndrome in pigs[J].J Virol,1998,72(6):5262-5267.
[9] Mankertz A,Caliskan R,Hattermann K,et al.Molecular biology of porcine circovirus:Analyses of gene expression and viral replication[J]. Vet Microbiol,2004,98(2):81-88.
[10] Liu Q,Tikoo S K,Babiuk L A,et al.Nuclear localization of the ORF2 protein encoded by porcine circovirus type 2[J].Virology,2001,285(1):91-99.
[11] 姚永红.猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法的建立及抗ORF2蛋白单克隆抗体的制备[D].泰安:山东农业大学,2012.
[12] Truong C,Mahe D,Blanchard P,et al.Identification of an immunerelevant ORF2 epitope from porcine circovirus type 2 as aserological marker for experimental and natural infection[J].Arch Virol,2001,146(6):1197-1211.
[13] Allan G M,Meehan B M,Todd D,et al.Novel porcine circoviruses from pigs with wasting disease syndrome[J].Vet Rec,1998,142(17):467-468.
[14] Chrunyk B A,Evans J,Lillquist J,et al.Inclusion body formation and protein stability in sequence variants of interleukin-1 beta[J].Biological Chemistry,1995,268:18053-18061.
[15] 乔宏兴,边传周,张晓根.抗猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[J].中国畜牧兽医,2011,38(6):163-165.

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Preparation of Monoclonal Antibodies against Porcine Circovirus Type 2 Cap Protein

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[1]	刘新月, 栗利芳, 王振豹, 张文亮, 张欣, 赵洪涛, 李鹏宇, 郑昊天, 肖进, 齐鹏. 猪圆环病毒2型合成肽疫苗佐剂筛选与免疫保护性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1068-1080.
[2]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[3]	周文锋, 张英婕, 白一涵, 张露华, 麦金辉, 王乃东, 杨毅, 湛洋, 王东亮. 猪圆环病毒2型全基因组序列分析及Cap蛋白CTL表位预测[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 656-665.
[4]	周伟, 刘旭平, 张艳敏, 彭雯娟, 赵亮, 谭文松. 无血清悬浮培养PK-15细胞及其对猪圆环病毒2型增殖的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2397-2405.
[5]	羊露露, 李安琪, 袁生, 黄良宗, 黄淑坚, 温峰, 郭锦玥. 广东省4株PCV2型分离株全基因组进化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1015-1023.
[6]	张敬寒, 李枝兰, 韩佃刚, 何帅, 刘金华, 吕念词, 邹丰才, 柴俊, 张以芳. 稳定表达IL-10的PK-15细胞的构建及其在PCV2增殖中的应用[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1085-1095.
[7]	张艳敏, 周亚南, 曹磊, 田园, 刘旭平, 谭文松, 赵亮. 猪瘟病毒E2-GM-CSF融合蛋白在HEK293T细胞中的表达和免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 669-676.
[8]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[9]	赵少若, 黄甜, 郝丽影, 吴洪超, 汪志艳, 崔宁宁, 王亚玲, 邓均华, 田克恭. 犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.
[10]	孙庆帅, 陈燕虹, 姚伦, 孙琪, 于学祥, 吴昊, 阮胜男, 雷铭楷, 严伟东, 何启盖. 猪圆环病毒2型和3型混合感染引起的母猪繁殖障碍诊治[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3982-3993.
[11]	谢珊珊, 杨琴, 邓肖玉, 易继海, 王震, 陈创夫. 线粒体融合蛋白2基因干扰与过表达对布鲁氏菌诱导巨噬细胞凋亡的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 283-293.
[12]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[13]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[14]	曾建宇, 董振远, 贾文凤, 张国中, 薛佳. 新城疫病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(9): 3423-3431.
[15]	曹迷霞, 关静渊, 杨剑, 王新蕊, 王玲力, 宾秀娟, 王可菲, 黄海资, 胡庭俊. 西番莲多糖提取物对猪圆环病毒2型感染RAW264.7细胞氧化应激的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(6): 2238-2246.