猪BPI蛋白重组载体的构建及真核表达

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.04.011

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (4): 847-851.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.04.011

猪BPI蛋白重组载体的构建及真核表达

殷学梅¹, 夏日炜¹, 孙丽¹, 朱国强², 包文斌¹, 吴圣龙¹

1. 扬州大学动物科学与技术学院, 扬州 225009;
2. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009

收稿日期:2015-01-16 出版日期:2015-04-20 发布日期:2015-05-05
通讯作者: 吴圣龙 E-mail:slwu@yzu.edu.cn
作者简介:殷学梅(1990-),女,江苏盐城人,硕士生,研究方向:猪遗传育种,E-mail:xmyin187397@163.com
基金资助:
江苏省科技支撑计划(农业)(BE2013319、BE2013345、BE2013062);常州市科技支撑计划(CE2013011)

Construction and Eukaryotic Expression of Porcine BPI Protein Recombinant Vector

YIN Xue-mei¹, XIA Ri-wei¹, SUN Li¹, ZHU Guo-qiang², BAO Wen-bin¹, WU Sheng-long¹

1. College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China;
2. College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China

Received:2015-01-16 Online:2015-04-20 Published:2015-05-05

摘要/Abstract

摘要： 试验旨在构建猪BPI真核表达载体,获得猪源BPI重组蛋白.根据GenScript's CloneEZ^® PCR Cloning Kit试剂盒,将BPI编码序列克隆至pUC57载体上,酶切与测序鉴定无误后,将重组质粒pUC57-BPI转染293-6E细胞,并利用SDS-PAGE和Western blotting方法检测其表达水平.结果显示,本试验成功构建了猪源BPI蛋白真核表达载体pUC57-BPI,并在293-6E细胞培养上清中检测到猪源BPI重组蛋白的表达.该猪源BPI重组蛋白体外表达系统的建立为今后深入研究猪BPI的生物学功能以及猪抗菌蛋白的制备提供了试验基础.

关键词: 猪; BPI蛋白; 真核表达

Abstract: In order to construction porcine bactericidal/permeability-increasing protein (BPI) eukaryotic expression vector and obtain porcine BPI protein recombinant vector. In this study, BPI coding sequence was cloned into vector pUC57 according to GenScript's CloneEZ^® PCR Cloning Kit. After correct identification with digestion and sequencing, the recombinant plasmid pUC57-BPI was transfected to 293-6E cells, then the expression of the recombinant protein was detected by SDS-PAGE and Western blotting. The results showed that we successfully constructed the eukaryotic expression vector pUC57-BPI. Furthermore, porcine BPI recombinant protein was expressed in cultural supernatant of 293-6E cells in eukaryotic expression system, and the establishment of porcine BPI recombinant protein expression system in vitro provided the basis for the deep study of porcine BPI biological function and the preparation of porcine antibacterial protein.

Key words: porcine; BPI protein; eukaryotic expression

中图分类号:

殷学梅, 夏日炜, 孙丽, 朱国强, 包文斌, 吴圣龙. 猪BPI蛋白重组载体的构建及真核表达[J]. , 2015, 42(4): 847-851.

YIN Xue-mei, XIA Ri-wei, SUN Li, ZHU Guo-qiang, BAO Wen-bin, WU Sheng-long. Construction and Eukaryotic Expression of Porcine BPI Protein Recombinant Vector[J]. , 2015, 42(4): 847-851.

参考文献

[1] Weiss J,Elsbach P,Olsson I,et al.Purification and characterization of a potent bactericidal and membrane active protein from the granules of human polymorphonuclear leukocytes[J].J Biol Chem,1978,253:2664-2672.
[2] Fisher C J,Marra M N,Palardy J E,et al.Human neutrophil bactericidal/permeability-increasing protein reduces mortality rate from endotoxin challenge:A placebo-controlled study[J].Cril Care Med,1994,22(4):553-558.
[3] Van Der Schaft D W,Toebes E A H,Haseman J R,et al.Bactericidal/permeability-increasing protein (BPI) inhibits angiogenesis via induction of apoptosis in vascular endothelial cells[J].Blood,2000,96(1):176-181.
[4] 周红,袁建成,周立新,等.杀菌性/通透性增加蛋白中和内毒素的作用的体内外研究[J].中华医学杂志,1999,79(4):304-305.
[5] 周红,郑江,秦孝建,等.抗人BPI抗体对猪源BPI体外生物活性的增强作用[J].第三军医大学学报,2002,24(1):76-78.
[6] 周宇麒,张天托,胡波,等.杀菌/通透性增加蛋白N端片段在原核细胞中的表达及其临床应用的初步探讨[J].中国免疫学杂志,2005,21(5):385-389.
[7] 高恒,宋延华,温纳楣,等.荷斯坦奶牛杀菌/通透性增加蛋白氮端基因原核表达载体的构建[J].中国奶牛,2009,1:6-8.
[8] 李丽,冯颖,吕喆,等.小鼠BPI36-259抗菌蛋白在原核细胞中的表达及其抗血清的制备[J].首都医科大学学报,2008,29(2):184-189.
[9] Bryskier A.Novelties in the field of anti-infectives in 1998[J].J Clin Infect Dis,1999,29(3):632-658.
[10] Alexander S,Bramson J,Foley R,et al.Protection from endotoxemia by adenoviral-mediated gene transfer of human bactericidal/permeability-increasing protein[J].Blood,2004,103(1):93-99.
[11] 郑江,袁建成,周红,等.杀菌性/通透性增强蛋白(BPI)模拟肽兔体内拮抗内毒素作用的研究[J].四川生理科学杂志,1999,21(4):11-15.
[12] 叶兰,訾臣,刘璐,等.仔猪BPI基因表达水平与大肠杆菌F18菌株感染的关系[J].遗传,2011,33(11):1225-1230.
[13] Zhu J,Zi C,Wu Z C,et al.Age-dependent expression of the BPI gene in Sutai piglets [J].Genet Mol Res,2013,12(2):2120-2126.
[14] Liu L,Wang J,Zhao Q H,et al.Genetic variation in exon 10 of the BPI gene is associated with Escherichia coli F18 susceptibility in Sutai piglets [J].Gene,2013,523:70-75.

[1]	陈楷文, 赵云娇, 王磊, 张剑搏, 马玉红, 吴国芳. 不同氧浓度下猪睾丸间质细胞转录组分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2185-2195.
[2]	韦明邦, 边巴琼达, 肖青青, 段梦琪, 强巴央宗, 商鹏. 藏猪CDKN1B基因克隆、生物信息学及表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2196-2206.
[3]	张方玮, 张琪, 雷亮亮, 孙武胜, 张迪, 张云鹏, 张净搏, 王修权, 张晶, 张树敏. 松辽黑猪HBEGF基因多态性及其与繁殖性状的关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2370-2379.
[4]	孙守湖, 陈志飞, 郭智轩, 俞婷, 王修武, 李松倍, 魏文康, 贺东生. 3种猪冠状病毒N基因密码子偏好性及宿主适应机制研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2403-2413.
[5]	曹琪, 金清, 袁意, 冯逸雪, 孔丹妮, 陈翔鸿, 吴斌, 宋文博, 汤细彪. 规模化猪场常见呼吸道细菌性病原的流行病学调查[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2439-2449.
[6]	史秋颖, 段宝敏, 李颖, 牛登云, 耿晨阳, 周佳伟, 王蕊, 冯敬敬. 2020—2021年中国部分地区猪流行性腹泻病毒S1基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2468-2478.
[7]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[8]	潘鹏丞, 雷宗全, 李显, 胡湘云, 秦谦涛, 覃兆鲜, 关志惠, 陈宝剑, 谢炳坤. 陆川猪MYL2基因生物信息学分析、真核表达载体构建及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1796-1806.
[9]	欧阳坤, 魏立民, 孙瑞萍, 解娅立, 齐琪, 李想, 刘圈炜, 晁哲, 张永亮, 陈婷. 姜黄素对海南屯昌猪生长性能、饲料养分表观消化率和血清生化指标的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1867-1875.
[10]	吴静璇, 孙征, 马雪莲, 张丽阳, 廖秀冬, 罗绪刚, 李素芬, 吕林. 中国畜禽饲料资源中镁含量的调查研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1888-1898.
[11]	黎明国, 李清春, 陈鑫, 卢世豪, 何凡, 祁梦凡, 张化鹏, 任玉军, 张庆泽, 符彬彬, 徐梦思, 艾子凯, 闫坤, 冯赟, 华再东, 黄涛, 毕延震. TET去甲基化酶对猪卵母细胞发育的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1907-1917.
[12]	王泽平, 王飞飞, 张芮铭, 付言峰, 赵为民, 戴超辉, 程金花, 廖超, 李辉. 苏紫猪SLA-1基因多态性及其抗病潜能分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1918-1927.
[13]	宋承磊, 张哲, 韦怡林, 杨松柏, 豆雅晴, 李晨雷, 刘蓥珂, 李新建, 杨峰, 李秀领, 王克君, 乔瑞敏, 韩雪蕾. 不同品种、季节和月龄对公猪精液品质的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1938-1946.
[14]	卓娜, 朱忠武, 李静, 胡世享, 王建昌, 林华, 陈朝林, 韩佃刚, 艾军, 陈培富. 猪源戊型肝炎病毒ORF2蛋白生物信息学分析及真核表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1959-1970.
[15]	康溥, 任照文, 蔡汝健, 吕宗吉, 黄育浩, 王晓虎. 广东及周边省份猪繁殖与呼吸综合征病毒2型谱系8毒株变异规律和传播研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2001-2011.

猪BPI蛋白重组载体的构建及真核表达

Construction and Eukaryotic Expression of Porcine BPI Protein Recombinant Vector

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