伪狂犬病病毒gB蛋白抗原表位基因串联构建及原核表达

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.04.006

›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (4): 810-815.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.04.006

伪狂犬病病毒gB蛋白抗原表位基因串联构建及原核表达

王雨, 吉艺宽, 程艺, 向柯宇, 张宝石, 琚春梅

华南农业大学兽医学院, 广州 510642

收稿日期:2014-10-08 出版日期:2015-04-20 发布日期:2015-05-05
通讯作者: 琚春梅 E-mail:juchunmei@scau.edu.cn
作者简介:王雨(1988-),男,山东枣庄人,硕士生,研究方向:微生物学与免疫学,E-mail:beyondwangyu@126.com
基金资助:
国家自然科学基金(31001074)

Construction of Tandem Epitopes of gB Gene of Pseudorabies Virus and its Prokaryotic Expression

WANG Yu, JI Yi-kuan, CHENG Yi, XIANG Ke-yu, ZHANG Bao-shi, JU Chun-mei

College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China

Received:2014-10-08 Online:2015-04-20 Published:2015-05-05

摘要/Abstract

摘要： 本试验通过自行设计两段引物,利用重叠延伸PCR方法,将伪狂犬病病毒(PRV)gB基因两段优势抗原表位序列串联,克隆至pMD18-T载体,测序正确后双酶切连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒;重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白表达情况.经检测,诱导后的重组蛋白获得表达,重组蛋白大小约为54 ku,其中串联蛋白大小约为34 ku.该重组蛋白可与伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体发生特异性反应,表明重组蛋白的抗原性良好.

关键词: 伪狂犬病病毒; gB基因; 抗原表位; 串联基因表达

Abstract: The two dominant epitope sequences of pseudorabies virus (PRV) gB gene were joined together by overlap-extension PCR method with two pairs of primers. The products were inserted into pMD18-T vector. After properly sequenced, the multi-epitope sequence was linked with pET-32a(+) vector, and then transformed into BL21(DE3). By being induced with IPTG, the targeted protein was detected by SDS-PAGE and Western blotting. The results showed the fusion protein was successfully expressed with the size of 54 ku including 34 ku tandem protein and could be combined with monoclonal antibody against gB which showed that the expressed protein had good antigenicity.

Key words: pseudorabies virus (PRV); gB gene; epitope; tandem gene expression

中图分类号:

Q786

王雨, 吉艺宽, 程艺, 向柯宇, 张宝石, 琚春梅. 伪狂犬病病毒gB蛋白抗原表位基因串联构建及原核表达[J]. , 2015, 42(4): 810-815.

WANG Yu, JI Yi-kuan, CHENG Yi, XIANG Ke-yu, ZHANG Bao-shi, JU Chun-mei. Construction of Tandem Epitopes of gB Gene of Pseudorabies Virus and its Prokaryotic Expression[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2015, 42(4): 810-815.

参考文献

[1] Mcinerbey J,Koou D.Economic analysis of alternative Aujeszky's disease control programmers[J].Veterinary Microbiology,1997,55(1):113-120.
[2] Daneil D,Anne-Marie T,Véronique B,et al.Effective protection of pigs against lethal pseudorabies virus infection after a single injection of low-dose Sindbis-derived plasmids encoding PrV gB,gC and gD glycoproteins[J]. Vaccine,2005,23(26):3483-3491.
[3] Nixdorf R,Klupp B G,Karger A,et al.Effects of truncation of the carboxy terminus of pseudorabies virus glycoprotein B on infectivity[J].Journal of Virology,2000,74(15):7137-7145.
[4] 殷震,刘景华.动物病毒学[M].第2版.北京:科学出版社,1997.
[5] 包新奇,黄绍华,刘巧荣,等.猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达[J].中国比较医学杂志,2012,3:12-16.
[6] 王大伟.抗伪狂犬病毒单克隆抗体的制备及gB基因编码蛋白抗原表位的表达[D].洛阳:河南科技大学,2011.
[7] Zaripov M M,Morenkov O S,Shmatchenko V V,et al.Immunological and functional characteristics of epitopes and regions of gB glycoprotein of Aujeszky's disease virus[J].Vopr Virusol,2001,46(2):41-45.
[8] 孙磊磊,程艺,梁梓森,等.伪狂犬病毒EP0基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究[J].中国畜牧兽医,2012,39(6):57-60.
[9] 程艺,王雨,吉艺宽,等.伪狂犬病病毒立即早期180基因的克隆及序列分析[J].中国畜牧兽医,2014,41(1):15-18.
[10] 童光志,陈焕春.伪狂犬病流行现状及中国应采取的防制措施[J].中国兽医学报,1999,1:4-5.
[11] 杨庆芳,宁官保,李俊达.猪伪狂犬病病毒的分离鉴定[J].山西农业科学,2011,8:886-889.
[12] 彭金美,安同庆,赵鸿远,等.猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析[J].中国预防兽医学报,2013,1:1-4.
[13] 童武,张青占,郑浩,等.免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J].中国动物传染病学报, 2013,3:1-7.

[1]	武月, 石兴亚, 张帅, 赵云环, 郭立明, 左玉柱, 范京惠. 猪伪狂犬病病毒分离鉴定及gE和gC基因遗传进化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2266-2277.
[2]	焦显芹, 马晓, 田润博, 刘颖, 马世杰, 陈红英. 表达猪圆环病毒2d型Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒的构建[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(5): 2278-2286.
[3]	王林青, 张刘辉, 陈曦艋, 马世杰, 宋月, 陈红英. 猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(4): 1815-1824.
[4]	王小格, 司煊瑛, 闫志伟, 王飞, 尤龙琪, 刘梗, 蔡茂, 梁珺珹, 梁玉秀, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2025, 52(2): 781-791.
[5]	梁东阁, 姚晨, 柴雅静, 蔡梦攀, 褚贝贝, 鲁维飞, 王江, 曾磊, 刘忠虎, 明胜利. 猪源Rab基因shRNA文库与稳定细胞株的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(3): 1250-1258.
[6]	杨大为, 刘书怡, 蔺雅婷, 陈虎, 张洪亮, 李桂梅. 猪伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(12): 5439-5448.
[7]	王林青, 赵丽, 陈曦艋, 吴少峰, 韩莹莹, 刘芳, 金钺, 陈红英. 河南省猪伪狂犬病病毒野毒感染血清学调查及gE基因遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(8): 3364-3372.
[8]	张国庆, 姜宇航, 张爽, 李乐天, 郝嘉翼, 陈竞, 邹万成, 李昌, 李太元, 高旭, 金宁一. 猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1575-1583.
[9]	张婧旭, 徐玉, 梁海英, 曾智勇, 汤德元, 王彬, 徐松平, 万娟, 祝羊. 伪狂犬病病毒贵州分离株与疫苗株遗传进化和抗原表位分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1093-1106.
[10]	杨苏珍, 刘运超, 邢云瑞, 孙亚宁, 尚延丽, 张改平. 基于量子点技术的猪伪狂犬病病毒gB抗体免疫层析试纸研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(10): 4160-4167.
[11]	徐娅玲, 张霁辉, 牛熙, 李升, 黄世会, 冉雪琴, 王嘉福. 非洲猪瘟病毒P72蛋白合成肽疫苗的构建及其免疫效力评估[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3083-3090.
[12]	谢思豪, 勾红潮, 卞志标, 李斌, 蔡汝健, 臧莹安, 李春玲. MLKL基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1934-1941.
[13]	邢嘉友, 樊文杰, 王昱旻, 鲁秀香, 宋月, 褚贝贝, 王江, 王梦迪. 他莫昔芬对猪伪狂犬病病毒体外增殖的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4503-4512.
[14]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[15]	杨明珠, 陈晓春, 宋佳诚, 侯亚欣, 李俊平. 重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 338-351.

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