大鼠原代肝脏细胞的分离培养及其膜受体鉴定

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (10): 144-147.

大鼠原代肝脏细胞的分离培养及其膜受体鉴定

刘禹, 兰海楠, 李维, 杨艳红, 付志玲, 马思慧, 吴天成, 郭风, 赵雪, 张辉, 崔焕忠, 吴旻, 杨欢, 李雨萌, 洪盼, 郑鑫

吉林农业大学动物科技学院, 吉林长春 130118

收稿日期:2013-03-08 出版日期:2013-10-20 发布日期:2013-12-19
通讯作者: 郑鑫 E-mail:zhengxin_3@yahoo.com.cn
作者简介:刘禹(1988-),男,山东人,硕士生,研究方向:动物遗传与繁育。兰海楠(1982-),男,吉林人,博士,助理研究员,研究方向:动物营养与免疫。刘禹和兰海楠对本文具有同等贡献,并列为第一作者。
基金资助:
国家自然科学基金(30871842);吉林省教育厅"十二五"技术研究项目(201239);吉林农业大学博士启动基金。

Isolation and Culture of Rat Primary Hepatocytes, and Identification of its Membrane Receptor

LIU Yu, LAN Hai-nan, LI Wei, YANG Yan-hong, FU Zhi-ling, MA Si-hui, WU Tian-cheng, GUO Feng, ZHAO Xue, ZHANG Hui, CUI Huan-zhong, WU Min, YANG Huan, LI Yu-meng, HONG Pan, ZHENG Xin

College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China

Received:2013-03-08 Online:2013-10-20 Published:2013-12-19

摘要/Abstract

摘要： 本研究采用改良的两步胶原酶灌流法分离培养大鼠肝脏细胞,并对其进行了形态学观察、功能检测及表面受体的鉴定,以探索其短期培养的最佳功能状态。结果表明,平均每只大鼠可获取2.12×10⁸个肝脏细胞,平均活率达94.23%;光镜下观察发现肝脏细胞呈多角形并成片生长;对肝脏细胞的LDH、Alb和尿素进行连续检测,结果发现细胞离体培养第3天功能较好;Mab263-PE单抗鉴定结果显示,肝脏细胞生长激素受体功能健全尚未受损,为细胞信号转导等相关试验奠定了基础。

关键词: 大鼠; 肝脏细胞; 原代培养; 生长激素受体; 鉴定

Abstract: This research adopted improved collagenase perfusion isolation to isolate and culture rat hepatocytes, and had carried on the observation of morphology, identification of function and membrane receptor to explore the optimal state of its short-term cultures. The results showed that 2.12 ×10⁸ hepatocytes per rat liver were obtained,and the average motility rate of cells was 94.23%. Hepatocytes were polygonal and grew into flakinesst under light microscope. We found that hepatocytes culture in vitro were better on the third day by the continual detection of LDH, Alb and urea. Function of growth hormone receptor on liver membrane had not been damaged by the identification of Mab263-PE, which laid the foundation for the cell signal transduction and relevant test.

Key words: rats; hepatocyte; primary culture; growth hormone receptor; identification

中图分类号:

Q813.1⁺1

刘禹, 兰海楠, 李维, 杨艳红, 付志玲, 马思慧, 吴天成, 郭风, 赵雪, 张辉, 崔焕忠, 吴旻, 杨欢, 李雨萌, 洪盼, 郑鑫. 大鼠原代肝脏细胞的分离培养及其膜受体鉴定[J]. , 2013, 40(10): 144-147.

LIU Yu, LAN Hai-nan, LI Wei, YANG Yan-hong, FU Zhi-ling, MA Si-hui, WU Tian-cheng, GUO Feng, ZHAO Xue, ZHANG Hui, CUI Huan-zhong, WU Min, YANG Huan, LI Yu-meng, HONG Pan, ZHENG Xin. Isolation and Culture of Rat Primary Hepatocytes, and Identification of its Membrane Receptor[J]. , 2013, 40(10): 144-147.

参考文献

1 于聪慧,冷希圣,魏玉华,等.胶原酶及灌流时间对大鼠肝脏细胞分离效果的影响[J].中华实验外科杂志,2000(6):67~68.
2 孙巍,李月红,张祥宏,等.成人食管上皮细胞的原代培养方法[J].细胞生物学杂志,2009(5):42~45.
3 余莹,张日华,朱自强,等.改良的小鼠原代肝脏细胞分离纯化方法[J].南京医科大学学报(自然科学版),2008(11):65~68.
4 陈钟,丁义涛.原位胶原酶循环灌注法分离猪肝脏细胞[J].细胞生物学杂志,2003(2):78~79.
5 周星辉,王丙力,谭焕然.大鼠肝实质细胞原代培养模型的研究及其功能鉴定[J].中国临床药理学与治疗学,2005(7):103.
6 寇小琴,刘鹏,李莹,等. 猪雄性生殖干细胞的分离培养及鉴定[J].中国畜牧兽医,2013,40(1):117~122.
7 隋峰,毛羽.生长激素受体与胰岛素样生长因子Ⅱ受体在肝脏细胞性肝癌中的表达[J].临床和实验医学杂志,2007(5):56~59.
8 蔡大伟,侯艳宁.原代肝脏细胞培养技术研究现状及其新药研发中的应用[J].解放军药学学报,2009(3):68~69.
9 Block G D,Locker J,Bowen W C,et al. Population expansion clonal growth and specific differentiation patterns in primary cultures of hepatocytes induced by HGF/SF EGF and TGF alpha in a chemically defined (HGM) medium[J]. Cell Biol,1996,132:1133~1149.
10 Casciano D A.Development and utilization of primary hepatocyte culture systems to evaluate metabolism DNA binding and repairof xenobiotics[J]. Drug Metab Rev,2000,32:1~14.
11 Eleswarapu S,Gu Z,Jiang H. Growth hormone regulation of insulin-like growth factor-Ⅰ gene expression may be mediated by multiple distal signal transducer and activator of transcription 5 binding sites[J]. Endocrinology,2008,149(5): 2230~2240.
12 Fitzgerald R C,Farthing M J G,Triadafilopoulos G. Novel adaptation of brush cytology technique for short-term primary culture of squamous and Barrett's esophageal cells[J]. Gastrointestinal Endoscopy,2001,54(2):186~189.
13 Kreamer B L, Staecker J L, Sawada N, et al.Use of a lowspeed,iso-density percoll centrifugation method to increase the viability of isolated rat hepatocyte preparations[J].In Vitro Cell Dev Biol,1986,22(4):201~211.
14 Papeleu P,Vanhaecke T,Henkens T,et al. Isolation of rat hepatocytes[J]. Methods in Molecular Biology,2006,320: 229~237.
15 Tateno C,Yoshizato K.Long-term cultivation of adult rat hepatocytes that undergo multiple cell divisions and express normal parenchymal phenotypes[J]. The American Journal of Pathology,1996,148(2):383.
16 Yamashita Y,Shimada M,Tsujita E,et al. High metabolic function of primary human and porcine hepatocytes in a polyurethane foam/spheroid culture system in plasma from patients with fulminant hepatic failure[J]. Cell Transplantation,2002,11(4): 379~384.
17 Yu J,Zhao L,Wang A,et al. Growth hormone stimulates transcription of the fibroblast growth factor 21 gene in the liver through the signal transducer and activator of transcription 5[J]. Endocrinology,2012,153(2): 750~758.

[1]	卢玉葵, 刘佳琪, 钟嘉诚, 陈济铛, 朱婉君, 张溢珊, 张济培. 鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2562-2572.
[2]	李志杰, 赵莹, 马鑫, 王萌, 余四九, 王立斌, 潘阳阳. 动物卵泡液外泌体分离方法及主要生殖功能研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1480-1488.
[3]	田常青, 张坤中, 齐玉梅, 史文静, 董志杰, 张浩浩, 何曾文, 芝吉, 赵学慧, 崇倩, 薛慧文, 苟惠天. 1株环境源单增李斯特菌的分离鉴定及生物特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1543-1555.
[4]	曹颖颖, 梁亮, 曾怡蓉, 钟清华, 袁小芳, 唐海波, 冷静. 滇西树鼩源沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1718-1728.
[5]	刘可欣, 王超, 张傲, 刘佳利, 谭斌, 张淑琴. 牛病毒性腹泻病毒LN-1株的分离鉴定及基因组序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1150-1159.
[6]	陈栋, 张言浩, 张阳, 李森, 周祖涛, 李自力. 3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1250-1258.
[7]	王冰艺, 马弘财, 邹明昊, 樊世杰, 元振杰, 拉巴次仁, 董海龙, 曾江勇. 牦牛源链球菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 745-753.
[8]	肖洋洋, 李芮芮, 马忠臣, 唐恬, 王娜, 陈创夫, 郑炜, 王勇, 王鹏雁. 新疆石河子地区牛支原体的分离鉴定及药物敏感性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 754-763.
[9]	钟华晨, 王丽芳, 郭晨阳, 刘嘉琳, 宋洁. 内蒙古地区乳房炎奶样与环境中细菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 817-826.
[10]	孙愉, 张昊, 李畅洋, 陶燕子, 王秋菊. 牛源抗氧化芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 359-367.
[11]	魏津, 王甲, 赵浩然, 刘博, 刘元杰, 姚文生, 刘燕, 马欣. 不同地区鸡毒支原体的分离鉴定及药物敏感性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 368-376.
[12]	杨福梅, 杨林富, 曾成, 杨志, 王康, 段纲, 代飞燕. 1株麂子源麦芽香肉杆菌的分离鉴定及生物学特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 398-407.
[13]	张薇, 武华, 阴雅洁, 李松励, 侯绍华. 新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定及其σC基因序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3520-3529.
[14]	席静, 易继海, 王月丽, 徐朕宇, 李培东, 张江伟, 陈创夫. 牛A群轮状病毒G10型XJ-2022株分离鉴定及基因型分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3530-3538.
[15]	何炎峻, 金圣子, 王爽, 柳可欣, 刘云. 薯蓣皂苷元对顺铂诱导大鼠肾损伤的缓解作用[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3633-3642.