绵羊肺腺瘤病毒衣壳蛋白杂交瘤细胞系的建立

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (1): 28-32.

绵羊肺腺瘤病毒衣壳蛋白杂交瘤细胞系的建立

斯日古楞, 么宏强, 马学恩

内蒙古农业大学兽医学院, 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室, 内蒙古呼和浩特 010018

收稿日期:2012-07-25 出版日期:2013-01-20 发布日期:2013-01-14
通讯作者: 么宏强,男,内蒙人,硕士生导师,副教授,从事动物分子病理学研究。E-mail:yaohq66@126.com;Tel:0471-4309175 E-mail:yaohq66@126.com
作者简介:斯日古楞(1979-),女,内蒙古人,讲师,博士,研究方向:动物分子病理学与免疫学。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31101788)。

Establishment of the Hybridoma Cell Lines of Monoclonal Antibody against Capsid Protein of Jaagsiekte Sheep Retrovirus

Siriguleng, YAO Hong-qiang, MA Xue-en

Key Laboratory of Clinical Diagnosis and Treatment Technology in Animal Disease, Ministry of Agriculture, College of Veterinary Science, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China

Received:2012-07-25 Online:2013-01-20 Published:2013-01-14

摘要/Abstract

摘要： 为了制备特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV) 内蒙株衣壳蛋白(CA)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系,以原核表达CA蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞经杂交瘤技术进行融合,同时以表达蛋白作为包被抗原进行特异性ELISA检测,共筛选到6株阳性杂交瘤细胞株。经过3次亚克隆后,最终得到了5株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株;再利用CA真核表达蛋白以间接免疫荧光法,对此5株杂交瘤细胞进行进一步的特异性鉴定。结果显示,有3株具有特异性强荧光反应,也能检测到目的基因的表达产物。本试验获得了3株稳定分泌抗JSRV-NM株CA蛋白McAb的杂交瘤细胞系,为建立检测病原的特异性诊断方法、分析JSRV-NM株CA蛋白的功能及鉴定B细胞抗原表位等奠定基础。

关键词: 绵羊肺腺瘤病毒; 衣壳蛋白; 杂交瘤技术; 酶联免疫吸附试验; 间接免疫荧光方法

Abstract: In order to obtain the monoclonal antibody (McAb) against CA protein of JSRV-NM strain, BALB/c mice were immunized with purified CA fusion protein expressed in E.coli. Myeloma cells SP2/0 were fused with the splenocytes of the fore times immunized mice by hybridomas technique, and six specific antibody-producing hybridomas were screened by indirect ELISA with CA fusion protein. Five hybridomas cells of them could product McAb steadily after 3 cycles of cloning, and three McAbs of them showed positive reaction to the CA protein expressed in eukaryotic cells by indirect immunefluorescence tests and western blotting analysis.The results indicated that we had obtained three hybridomas cells which could product specific McAb against CA protein of JSRV-NM strain steadily. The McAb against CA protein of JSRV-NM strain developed would be useful as a basis of diagnosis and epitope identification.

Key words: jaagsiekte sheep retrovirus(JSRV); capsid protein; hybridomas technique; ELISA; indirect immunefluorescence

中图分类号:

Q813

斯日古楞, 么宏强, 马学恩. 绵羊肺腺瘤病毒衣壳蛋白杂交瘤细胞系的建立[J]. , 2013, 40(1): 28-32.

Siriguleng, YAO Hong-qiang, MA Xue-en. Establishment of the Hybridoma Cell Lines of Monoclonal Antibody against Capsid Protein of Jaagsiekte Sheep Retrovirus[J]. , 2013, 40(1): 28-32.

[1]	焦琳琳, 成玉婷, 吴庆国, 吴双, 吴植, 朱善元, 钱莺娟. 鸭坦布苏病毒Capsid蛋白原核表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2395-2402.
[2]	刘庆庆, 吴鹏, 李培东, 张江伟, 陈创夫, 肖陈诚. 表达猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的重组腺病毒的构建及其免疫原性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1024-1031.
[3]	李双星, 刘业兵, 柳方远, 吉婧, 杜吉革, 李倩琳, 朱真, 李启红, 陈小云, 印春生. 猫传染性腹膜炎病毒N蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(1): 273-279.
[4]	张永宁, 张舟, 诸明欣, 梅琳, 王彩霞, 吴绍强, 林祥梅. A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(1): 256-263.
[5]	钟罗华, 邓舜洲, 胡杨, 徐昌满, 罗锋, 张文波, 陈松昌. 表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组猪痘病毒的构建及鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(2): 279-290.
[6]	高祥, 李辉, 张礼洲, 卢珍, 王永强, 高立, 吴甜甜, 高玉龙, 刘长军, 王笑梅, 祁小乐. 传染性法氏囊病病毒超强毒株衣壳蛋白的可溶性表达、纯化与活性分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(7): 2096-2102.
[7]	孙明君, 邱芳, 张金玲, 郑小龙. 进出口动物中新霉素ELISA检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(12): 3163-3169.
[8]	孟日增, 宋战昀, 聂丹丹, 石建平, 吴连鹏, 马文晨. 伪狂犬病病毒闽A株单克隆抗体的制备与鉴定[J]. , 2015, 42(5): 1110-1115.
[9]	韩青, 王静, 徐豪, 杨娟. 牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立[J]. , 2015, 42(10): 2625-2630.
[10]	贺会利, 徐敏, 余娟, 魏小兵, 闫艺婷, 勾肖晶, 刘兴友. 鸡传染性支气管炎病毒(IBV)ZZ2004株核衣壳蛋白基因的克隆及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(9): 15-20.
[11]	刘伟，朱怡平，张戴婷，关敏慧，何飞龙，杨谦，郭霄峰. 猪细环病毒2型衣壳蛋白的原核表达及纯化[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(5): 23-28.
[12]	张辉，崔焕忠,兰海楠，杨艳红，付志玲，郑鑫. 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白与糖蛋白的表达纯化及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(3): 103-106.
[13]	陈玉明，张礼洲，任宪刚，高立，秦立廷，高玉龙，王永强，高宏雷，王笑梅，祁小乐. 不同毒力传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(1): 30-34.
[14]	杨宇航, 王文玉, 刘红娜, 刘东旭, 时坤, 李健明, 杜锐. 细胞活力及细胞免疫力检测方法的研究进展[J]. , 2013, 40(6): 142-145.
[15]	陈颖, 王嘉福, 王芳, 袁恬, 张兆强, 冉雪琴. 紫花苜蓿对猪骨骼肌细胞肝X受体基因和蛋白表达的影响[J]. , 2013, (5): 30-34.