四环素诱导的猪黑素皮质激素受体-4基因真核表达载体的构建

›› 2013, Vol. 40 ›› Issue (1): 13-16.

四环素诱导的猪黑素皮质激素受体-4基因真核表达载体的构建

解宇¹, 汪亮², 张冬杰², 刘娣^1,2, 孙亚蒙¹

1. 东北农业大学动物科学技术学院, 黑龙江哈尔滨 150030;
2. 黑龙江省农业科学院畜牧所, 黑龙江哈尔滨 150086

收稿日期:2012-07-17 出版日期:2013-01-20 发布日期:2013-01-14
通讯作者: 刘娣,教授,博士生导师,研究方向:动物遗传育种与繁殖。E-mail:liudi1963@163.com E-mail:liudi1963@163.com
作者简介:解宇(1987-),女,黑龙江人,硕士生,研究方向:动物遗传育种与繁殖。
基金资助:
现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-36);转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08006-003)。

Construction of Tetracycline-inducible MC4R Gene Eukaryotic Expression Vector in Pig

XIE Yu¹, WANG Liang², ZHANG Dong-jie², LIU Di^1,2, SUN Ya-meng¹

1. College of Animal Sciences and Technology, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;
2. Animal Husbandry Research Institute, Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150086, China

Received:2012-07-17 Online:2013-01-20 Published:2013-01-14

摘要/Abstract

摘要： 猪黑素皮质激素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)基因是影响猪生长肥育的主效基因之一,为了进一步研究MC4R基因的生物学功能,制备高成活率转基因猪,通过采用条件性诱导表达载体系统,PCR方法扩增了猪MC4R基因完整编码区,四环素诱导表达系统(Tet-on)的启动子调控区与转录调节元件。采用双酶切和连接等方法将上述元件连接到pcDNA3.1(+)上,构建了重组质粒pcDNA3.1(+)-rtTA-P_Tight-MC4R。经双酶切和测序鉴定,结果显示片段正向连接且片段全长测序正确。试验成功构建了四环素诱导的pcDNA3.1(+)-rtTA-P_Tight-MC4R真核表达载体, 并能在时间特异性方面调控MC4R基因的表达。

关键词: 猪; MC4R基因; 四环素诱导表达系统

Abstract: Pig melanocortin-4 receptor (MC4R) gene was one of the major genes affect swine growing and finishing, to further study the biological function of the MC4R gene, preparation of high survival rate of transgenic pigs,through the use of Tet gene expression system,promoter regulatory region and transcription element of Tet-on and sequence of pig MC4R gene was amplified by PCR method. The above-mentioned components were linked into pcDNA3.1(+) to construct recombinant vector pcDNA3.1(+)-rtTA-P_Tight-MC4R by double digestions and connections methods. Restricted enzymes analysis and DNA sequencing showed that the sequence of the recombinant plasmid was correct and fragment was properly connected. Successfully constructed the Tetracycline-inducible pig MC4R eukaryotic expression vector, and in time-specific regulation of expression of the MC4R gene.

Key words: pig; MC4R gene; Tetracycline-inducible expression system

中图分类号:

解宇, 汪亮, 张冬杰, 刘娣, 孙亚蒙. 四环素诱导的猪黑素皮质激素受体-4基因真核表达载体的构建[J]. , 2013, 40(1): 13-16.

XIE Yu, WANG Liang, ZHANG Dong-jie, LIU Di, SUN Ya-meng. Construction of Tetracycline-inducible MC4R Gene Eukaryotic Expression Vector in Pig[J]. , 2013, 40(1): 13-16.

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