大豆凝集素单克隆抗体的制备及鉴定

中国畜牧兽医

大豆凝集素单克隆抗体的制备及鉴定

张海全^1,2, 车东升^1,2, 刘飞飞^1,2, 穆成龙^1,2, 谷琳琳^1,2, 孙泽威¹, 秦贵信¹

1. 吉林农业大学,动物生产及产品质量安全教育部重点实验室, 吉林长春 130118;
2. 吉林农业大学动物科学技术学院, 吉林长春 130118

收稿日期:2012-02-29 出版日期:2012-09-20 发布日期:2012-09-18
通讯作者: 秦贵信,教授,博士生导师。E-mail:guixin@public.cc.jl.cn E-mail:guixin@public.cc.jl.cn
作者简介:张海全(1986-),男,吉林人,硕士生,主要从事动物营养与饲料科学研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(30871802)。

Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against Soybean Agglutinin

ZHANG Hai-quan^1,2, CHE Dong-sheng^1,2, LIU Fei-fei^1,2, MU Cheng-long^1,2, GU Lin-lin^1,2, SUN Ze-wei¹, QIN Gui-xin¹

1. Key Laborotory of Animal Production and Product Quality and Security, Ministry of Education, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China;
2. College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China

Received:2012-02-29 Online:2012-09-20 Published:2012-09-18

摘要/Abstract

摘要： 为获得分泌抗大豆凝集素(SBA)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以纯化的SBA为抗原,免疫BALB/c小鼠,加强免疫3 d后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,应用有限稀释法和间接ELISA 方法克隆筛选出2株分泌抗SBA单克隆抗体的杂交瘤细胞系A7、F12。细胞上清抗体效价均在1∶2×10³以上,腹水抗体效价均为1∶1×10⁶,单抗亚型鉴定结果均为IgG2b型,分子质量为189.6 ku,亲和常数为7.1×10⁷ mol/L,Western blotting结果表明,2株单抗具有较高的特异性。该McAb的制备为建立SBA定量检测方法奠定了基础。

关键词: 大豆凝集素; 单克隆抗体; 制备; 鉴定

Abstract: To prepare hybridoma cells secreting specific monoclonal antibody against soybean agglutinin(SBA),the BALB/c mice were immunized by the purified SBA. The spleen cells isolated from the mice in the highest titer were fused with SP2/0 myeloma cells after three days of last immunization. Two hybridoma cell lines secreting McAb against SBA were established after screening by ELISA and cloning four times by limiting dilution, named as A7,F12. The titers of secreting antibody from cell culture supernatants were both above 1∶2×10³,while above 1∶1×10⁶ from ascites of the mice. The subtypes of the monoclonal antibodies were both IgG2b,the molecular weight was 189.6 ku,the affinity constant was 7.1×10⁷ mol/L, Western blotting showed high specificity with SBA. The preparation of the McAb against SBA provided an useful tool for quantitative determination of SBA.

Key words: soybean agglutinin; monoclonal antibody; preparation; identification

中图分类号:

张海全, 车东升, 刘飞飞, 穆成龙, 谷琳琳, 孙泽威, 秦贵信. 大豆凝集素单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医.

ZHANG Hai-quan, CHE Dong-sheng, LIU Fei-fei, MU Cheng-long, GU Lin-lin, SUN Ze-wei, QIN Gui-xin. Preparation and Identification of Monoclonal Antibody against Soybean Agglutinin[J]. .

[1]	卢玉葵, 刘佳琪, 钟嘉诚, 陈济铛, 朱婉君, 张溢珊, 张济培. 鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2562-2572.
[2]	李志杰, 赵莹, 马鑫, 王萌, 余四九, 王立斌, 潘阳阳. 动物卵泡液外泌体分离方法及主要生殖功能研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1480-1488.
[3]	田常青, 张坤中, 齐玉梅, 史文静, 董志杰, 张浩浩, 何曾文, 芝吉, 赵学慧, 崇倩, 薛慧文, 苟惠天. 1株环境源单增李斯特菌的分离鉴定及生物特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1543-1555.
[4]	曹颖颖, 梁亮, 曾怡蓉, 钟清华, 袁小芳, 唐海波, 冷静. 滇西树鼩源沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1718-1728.
[5]	刘可欣, 王超, 张傲, 刘佳利, 谭斌, 张淑琴. 牛病毒性腹泻病毒LN-1株的分离鉴定及基因组序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1150-1159.
[6]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[7]	陈栋, 张言浩, 张阳, 李森, 周祖涛, 李自力. 3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定与药敏试验[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1250-1258.
[8]	王冰艺, 马弘财, 邹明昊, 樊世杰, 元振杰, 拉巴次仁, 董海龙, 曾江勇. 牦牛源链球菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 745-753.
[9]	肖洋洋, 李芮芮, 马忠臣, 唐恬, 王娜, 陈创夫, 郑炜, 王勇, 王鹏雁. 新疆石河子地区牛支原体的分离鉴定及药物敏感性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 754-763.
[10]	钟华晨, 王丽芳, 郭晨阳, 刘嘉琳, 宋洁. 内蒙古地区乳房炎奶样与环境中细菌的分离鉴定及耐药性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 817-826.
[11]	孙愉, 张昊, 李畅洋, 陶燕子, 王秋菊. 牛源抗氧化芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 359-367.
[12]	魏津, 王甲, 赵浩然, 刘博, 刘元杰, 姚文生, 刘燕, 马欣. 不同地区鸡毒支原体的分离鉴定及药物敏感性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 368-376.
[13]	杨福梅, 杨林富, 曾成, 杨志, 王康, 段纲, 代飞燕. 1株麂子源麦芽香肉杆菌的分离鉴定及生物学特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 398-407.
[14]	张薇, 武华, 阴雅洁, 李松励, 侯绍华. 新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定及其σC基因序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3520-3529.
[15]	席静, 易继海, 王月丽, 徐朕宇, 李培东, 张江伟, 陈创夫. 牛A群轮状病毒G10型XJ-2022株分离鉴定及基因型分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3530-3538.