绵羊生殖道抗菌肽cDNA克隆及真核表达载体构建

›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (6): 69-72.

绵羊生殖道抗菌肽cDNA克隆及真核表达载体构建

库朝锋^1，2，王新华²，薄新文²，张慧^1，2，吕廷德^1，2，李娜^1，2

（1.石河子大学动物科技学院, 石河子 832003; 2.新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室，石河子 832000）

收稿日期:2008-12-19 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-06-20 发布日期:2009-06-20
通讯作者: 薄新文

cDNA Clone of Antimicrobial Peptide from the Reproductive Tract of Ovis aries and Construction of its Eukaryotic Expression Vector

KU Chao-feng^1，2，WANG Xin-hua²，BO Xin-wen²，ZHANG Hui^1，2，LV Ting-de^1，2， LI Na^1，2

(1.College of Animal Science & Technology, Shihezi University, Shihezi 832003, China; 2.The Breed and Biotechnology Key Laboratory of Sheep in Xinjiang Bingtuan, Shihezi 832000, China)

Received:2008-12-19 Revised:1900-01-01 Online:2009-06-20 Published:2009-06-20
Contact: BO Xin-wen

摘要/Abstract

摘要： 绵羊生殖道抗菌肽（ORTAP40）是从中国美利奴绵羊生殖道分离的一种新型的阳离子抗菌肽,在绵羊发育早期的防御中起到了主要的作用。在本研究中，根据ORTAP40 N端氨基酸序列设计引物，利用3′RACE技术克隆了绵羊生殖道抗菌肽3′末端全长cDNA序列，并被GenBank收录，登录号为FJ514476，经过cDNA序列分析显示，ORTAP40是一个4.8 ku的小肽，与先期分离纯化的分子质量一致。作者随后参照巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子偏好性，设计并人工合成了ORTAP40成熟肽目的基因片段，所合成的ORTAP40基因全长120 bp，通过基因重组的方法将目的基因克隆到pPIC3.5K和pPICZαA表达载体上，成功构建了重组酵母胞内表达载体pPIC3.5K-ORTAP40和外泌表达载体pPICZαA-ORTAP40，为抗菌肽的开发和应用奠定了基础。

关键词: 绵羊生殖道; 抗菌肽; cDNA克隆; 表达载体

Abstract: ORTAP40 is an antimicrobial peptide which is isolated from the reproductive tract of Ovis aries Chinese Merino. It plays a central role in the early innate immune defense against infection. In this study, we cloned the 3′ end full-length cDNA of ORTAP40 from reproductive tract of Ovis aries, using rapid amplification of cDNA ends (RACE) and N-terminus amino acids sequence（FJ514476）. The observed cDNA structure indicated that ORTAP40 theoretical average molecular weight for the peptide of 40 amino acid residues is 4.8 ku in agreement with reported. A mature peptide gene was synthesized according to the amino acid sequence of ORTAP40 and the biased codon usage of Pichia pastoris, the gene was 120 bp in length and was inserted into Pichia pastoris expression vector pPIC3.5K, pPICZαA by gene recombination and constructed expression plasmid pPIC3.5K-ORTAP40 and pPICZαA-ORTAP40.

Key words: reproductive tract of Ovis aries; antimicrobial peptide; cDNA clone; expression vector

中图分类号:

库朝锋;王新华;薄新文;张慧;吕廷德;李娜;. 绵羊生殖道抗菌肽cDNA克隆及真核表达载体构建[J]. , 2009, 36(6): 69-72.

KU Chao-feng;WANG Xin-hua;BO Xin-wen;ZHANG Hui;LV Ting-de;LI Na;. cDNA Clone of Antimicrobial Peptide from the Reproductive Tract of Ovis aries and Construction of its Eukaryotic Expression Vector[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2009, 36(6): 69-72.

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