副猪嗜血杆菌病原检测及aroA基因PCR-RFLP分型

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (11): 90-94.

副猪嗜血杆菌病原检测及aroA基因PCR-RFLP分型

彭昊, 谢宇舟, 李军, 禤雄标, 马春霞, 胡帅, 杨威, 许力干, 谢永平, 陈泽祥, 潘艳

广西壮族自治区兽医研究所,广西南宁 530001

收稿日期:1900-01-01 修回日期:2011-05-20 出版日期:2011-11-20 发布日期:2011-11-20
通讯作者: 陈泽祥

Detection and Genotyping of Haemophilus parasuis aroA Gene with PCR-RFLP

PENG Hao, XIE Yu-zhou, LI Jun, XUAN Xiong-biao, MA Chun-xia, HU Shuai, YANG Wei, XU Li-gan, XIE Yong-ping, CHEN Ze-xiang, PAN Yan

Guangxi Veterinary Research Institute, Nanning 530001, China

Received:1900-01-01 Revised:2011-05-20 Online:2011-11-20 Published:2011-11-20

摘要/Abstract

摘要： 本试验应用PCR方法及PCR-RFLP技术对aroA基因在副猪嗜血杆菌病原检测及基因分型中的作用进行探讨。以针对aroA基因的PCR引物成功检测出18株来自广西各地区猪场的副猪嗜血杆菌,敏感性检测结果表明,该PCR方法可检测的最低菌数为10²个。对该18株副猪嗜血杆菌进行aroA基因的序列测定,并进行aroA基因的酶切位点分析,筛选出Hind Ⅲ和FokⅠ两种限制性内切酶,利用PCR-RFLP技术对1株血清5型参考菌株与本研究中18株广西菌株aroA基因的完整编码序列进行Hind Ⅲ和FokⅠ限制酶谱分析,结果显示可分为与毒力相关的3种谱型。本研究结果表明,应用PCR方法及PCR-RFLP技术对副猪嗜血杆菌进行检测分析有助于更好地研究副猪嗜血杆菌的生物学特性及aroA基因的功能。

关键词: 副猪嗜血杆菌; 病原检测; PCR-RFLP

Abstract: The PCR assay and PCR-RFLP were applied to study the function of aroA gene on the detection and genotyping of Haemophilus parasuis. 18 strains of Haemophilus parasuis isolated from swine in Guangxi were detected successfully by using the PCR assay with primers targeted to aroA gene, and the sensitive test showed that the lowest amount of Hps detectable by this PCR-based test was 10². The aroA gene of the 18 strains was sequenced, and enzyme restriction analysis of the aroA sequences available was performed to define which restriction enzymes more practical. HindⅢ and FokⅠ were chosen to do RFLP analysis in all 18 Haemophilus parasuis strains and one reference strain. The result of the analysis showed that there were three patterns among the groups. The study suggests that the PCR assay and PCR-RFLP applied to detection and genotyping are useful to further research the biological characteristics and gene function of Haemophilus parasuis.

Key words: Haemophilus parasuis; pathogen detection; PCR-RFLP

中图分类号:

S852.61⁺2

彭昊;谢宇舟;李军;禤雄标;马春霞;胡帅;杨威;许力干;谢永平;陈泽祥;潘艳. 副猪嗜血杆菌病原检测及aroA基因PCR-RFLP分型[J]. , 2011, 38(11): 90-94.

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