荧光定量PCR检测牛性别相关基因DAX1表达的标准质粒和标准曲线的构建

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (9): 94-99.

荧光定量PCR检测牛性别相关基因DAX1表达的标准质粒和标准曲线的构建

徐超1，2，杜卫华2，王宗礼1，余大为2，王栋2，郝海生2，赵学明2，朱化彬2

（1.中国农业科学院草原研究所，呼和浩特 010010； 2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-09-20 发布日期:2010-09-20
通讯作者: 王宗礼

Construction of Bovine Sex Related Genes DAX1 Standard Plasmid and Standard Curve by Real-time RT-PCR

XU Chao1，2，DU Wei-hua2， WANG Zong-li1，YU Da-wei2, WANG Dong2， HAO Hai-sheng2， 
ZHAO Xue-ming2， ZHU hua-bin2

(1.Grassland Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Hohhot 010010，China；2.Institute of Animal Sciences，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193，China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-09-20 Published:2010-09-20
Contact: WANG Zong-li

摘要/Abstract

摘要： 本研究根据GenBank中登录的剂量敏感的性别反转－先天性肾上腺发育不良基因1(dosage-sensitive sex reversal, adrenal hypoplasia critical region, on chromosome X, gene 1，DAX1)设计引物，构建包含DAX1基因cDNA片段的质粒，作为中国荷斯坦牛DAX1基因mRNA定量检测的标准品，建立了DAX1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法。结果表明，该方法特异性好，检测灵敏度达102拷贝，线性范围为102～106拷贝，阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值间有着良好的线性关系(r=0.99975),扩增效率高(E=100%)，可以作为检测牛DAX1基因mRNA定量检测方法。

关键词: 牛生殖嵴; DAX1; 荧光定量PCR; TaqMan探针; 标准曲线

Abstract: The primer was designed based on dosage-sensitive sex reversal adrenal hypoplasia critical region on chromosome X gene 1 （DAX1） according to the sequence which was submitted on GenBank. A recombinant plasmid contained cDNA fragment in DAX1 gene was constructed and used for the standard substance for quantitative detection of mRNA of the DAX1 gene in Holstein cows, a real-time PCR was developed for detection of DAX1 gene. The results revealed that this method had a good specificity, and the sensitivity was up to 102, range from 102 to 106. The cutoff value Ct had a good linear correlation with PCR samples. This method could be detected DAX1 gene in bovine quantitatively.

Key words: genital ridge; DAX1; real-time quantitative PCR; TaqMan probe; standard curve

中图分类号:

Q786

徐超;;杜卫华;王宗礼;余大为;王栋;郝海生;赵学明;朱化彬. 荧光定量PCR检测牛性别相关基因DAX1表达的标准质粒和标准曲线的构建[J]. , 2010, 37(9): 94-99.

XU Chao;;DU Wei-hua;WANG Zong-li;YU Da-wei;WANG Dong;HAO Hai-sheng;ZHAO Xue-ming;ZHU hua-bin. Construction of Bovine Sex Related Genes DAX1 Standard Plasmid and Standard Curve by Real-time RT-PCR[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2010, 37(9): 94-99.

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