分子标记株鸭圆环病毒感染性核酸的构建

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (9): 91-93.

分子标记株鸭圆环病毒感染性核酸的构建

万春和，傅光华，施少华，程龙飞，陈红梅，黄瑜

（福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州 350013）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-09-20 发布日期:2010-09-20
通讯作者: 黄瑜

Molecular Cloning of the Infectious Genomic DNA of Duck Circovirus with a Genetic Marker

WAN Chun-he, FU Guang-hua, SHI Shao-hua, CHENG Long-fei, CHEN Hong-mei, HUANG Yu

（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350013, China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-09-20 Published:2010-09-20
Contact: HUANG Yu

摘要/Abstract

摘要： 以临床分离的鸭圆环病毒（duck circovirus）（GenBank登录号：GU168779）阳性病料为材料，根据GenBank中所登录的鸭圆环病毒基困序列设计引物并对设计的引物5′末端进行磷酸化处理，通过引物设计替换碱基，以突变形成EcoRⅠ酶切位点。利用PCR方法扩增鸭圆环病毒的基因，经胶回收后，用T4 DNA连接酶进行环化，以获得鸭圆环病毒具有感染性的核酸。在含有分子标记的两端设计引物，进行PCR扩增，对PCR产物进行胶回收，连接T载体后测序，对胶回收产物进行EcoRⅠ酶切鉴定，均证明在第587位成功插入EcoRⅠ酶切位点。结果表明，本试验已成功构建带有分子标记的鸭圆环病毒的感染性核酸，为进一步开展该病毒的分子调控机制、致病性和开发基因工程疫苗研究奠定基础。

关键词: 鸭圆环病毒; 分子标记; 感染性核酸

Abstract: Duck circovirus (DuCV), a potential immunosuppressive virus in ducks. To generate the infectious genomic DNA of duck circovirus with a genetic marker, the full-length genome of the virus was amplified using PCR method. A EcoR Ⅰ restriction enzyme site was inserted into the clone as a genetic marker by site-directed mutagenesis. T4 ligase was used to cyclized the DuCV genome by phosphorylation at the 5′ terminal, in order to construct an infectious molecular clone. The viral genome could be differentiated from the wild-type parent by gene fragment sequence analyzed and EcoR Ⅰ restriction digestion. The results indicated that the infectious molecular genomic DNA of duck circovirus with a genetic marker were constructed. This study layed foundation to on pathogenesis, vaccination, molecular diagnosis and development of vaccine candidates of DuCV.

Key words: duck circovirus; genetic marker; the infectious genomic

中图分类号:

万春和;傅光华;施少华;程龙飞;陈红梅;黄瑜. 分子标记株鸭圆环病毒感染性核酸的构建[J]. , 2010, 37(9): 91-93.

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