新城疫病毒DF-1细胞蚀斑纯化方法的建立

中国畜牧兽医

新城疫病毒DF-1细胞蚀斑纯化方法的建立

赵明¹^，2，戈胜强²，王静静²，赵云玲²，郑东霞²，左媛媛²，于松梅²，王晓真²，刘春菊²，王英丽²，刘华雷²，包静月²，吴晓东²，单虎¹，王志亮²

（1.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109；2.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032）

收稿日期:2013-11-25 出版日期:2014-06-20 发布日期:2014-07-24
通讯作者: 单虎，教授。E-mail：shanhu67@163.com 王志亮，研究员。E-mail：wangzhiliang@cahec.cn
作者简介:赵明（1989—），女，山东人，硕士生，研究方向：动物传染病防治与生物制品学。戈胜强（1982—），男，山东人，博士，研究方向：病毒样颗粒疫苗构建及新城疫病毒、禽流感病毒、外来动物疫病病原分子生物学。赵明和戈胜强对本文具有相同贡献，并列为第一作者。
基金资助:
公益性行业（农业）科研专项经费（201303033）；科技基础性工作专项（2012FY111000）。

Establishment of Plaque Purification for Newcastle Disease Virus using DF-1 Cell

Received:2013-11-25 Online:2014-06-20 Published:2014-07-24

摘要/Abstract

摘要： 本研究对DF-1细胞的培养条件及新城疫病毒（NDV）DF-1细胞的蚀斑纯化方法进行了优化摸索，结果显示相较于DMEM培养基，DF-1细胞更适宜在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中生长，DF-1细胞以3×10⁵/孔的剂量覆盖6孔板能获得最佳的铺板效果，吸附病毒后1.5 h覆盖第1层琼脂，48 h后覆盖第2层琼脂能获得最佳的蚀斑形成效果。通过对蚀斑纯化株F和HN基因测序分析，结果表明蚀斑纯化后无任何变异。通过此方法可在1个星期之内获得稳定的纯化毒株，方法简单、可重复性强、纯化效率高。

关键词: 新城疫病毒; DF-1细胞; 蚀斑纯化

Abstract: In order to establish a new cell culture system for the purification of Newcastle disease virus （NDV）,NDV was plaque purified by using the chicken embryo fibroblast cell line (DF-1). The results showed that,compared to the common basal media (DMEM) used in cell culture, DMEM/F12 with 15% fetal bovine serum was better. The optimized purification conditions were as follows, 3×10⁵ DF-1 cells per well were seeded into 6 well plates for 24 h, then infected with NDV for 1.5 h. After removing all virus from each plate, the first agarose overlay was added and incubated for 48 h before the operating of the second agarose overlay. After purification, the homologies of F and HN genes between the purified virus and the original virus were 100%, respectively, which indicated no mutation was found during the purification and screening. By using this method, it would take only one week to obtain the purified virus with the simply manipulability, high repeatability and efficiency.

Key words: Newcastle disease virus; DF-1 cell; plaque purification

赵明，戈胜强，王静静，赵云玲，郑东霞，左媛媛，于松梅，王晓真，刘春菊，王英丽，刘华雷，包静月，吴晓东，单虎，王志亮. 新城疫病毒DF-1细胞蚀斑纯化方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

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