串联表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5表位蛋白间接ELISA方法的建立

中国畜牧兽医

串联表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5表位蛋白间接ELISA方法的建立

陈如敬，吴学敏，车勇良，王隆柏，刘玉涛，严山，魏宏，庄向生，周伦江

（福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福建福州 350013）

收稿日期:2013-10-14 出版日期:2014-04-20 发布日期:2014-05-27
通讯作者: 周伦江（1973—），男，福建人，研究员，博士，研究方向：动物传染病。E-mail：lunjiang@163.com
作者简介:陈如敬（1984—），男，福建人，硕士生，助理研究员，研究方向：动物传染病。
基金资助:
福建省财政专项——福建省农业科学院创新团队建设项目（STIF-Y02）；福建省农科院青年人才科技创新基金（2012DQB-6）。

Development of an Indirect ELISA Assay for Detecting Antibody to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus with Recombinant GP5-encoding-epitopes Protein

CHEN Ru-jing, WU Xue-min, CHE Yong-liang, WANG Long-bai, LIU Yu-tao, YAN Shan, WEI Hong, ZHUANG Xiang-sheng，ZHOU Lun-jiang

（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine/Fujian Animal Disease Control Technology Development Center, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350013，China）

Received:2013-10-14 Online:2014-04-20 Published:2014-05-27

摘要/Abstract

摘要： 利用猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）GP5抗原表位串联表达重组蛋白作为包被抗原，建立检测PPRSV抗体的间接ELISA方法。重组蛋白最佳包被浓度为7.5 μg/mL，最佳封闭液为5%脱脂奶粉，37 ℃封闭2 h；血清最适稀释度为1∶100，37 ℃作用2 h；兔抗猪IgG/辣根酶（HRP）（1∶3000），37 ℃作用2 h；37 ℃避光显色15 min读取D_{450 nm}值。结果经统计学分析得出，S/P值≥0.254为阳性，S/P值≤0.212为阴性。所建立的ELISA方法检测其他5种猪常见病原阳性血清，其D_{450 nm}值均小于0.212。利用建立的ELISA方法对临床免疫勃林格殷格翰猪繁殖与呼吸综合征活疫苗4周后的猪血清70份进行检测，其D_{450 nm}值均大于0.85，表明本研究建立的重组GP5表位蛋白间接ELISA方法可用于临床样品的监测。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒; 重组GP5表位蛋白; 间接ELISA

Abstract: An indirect ELISA assay was constructed to detect porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV） antibodies with recombinant GP5-encoding-epitopes protein.The optimal concentration of antigen was 7.5 μg/mL; The blocking buffer was 5% defatted milk powder with the blocking time 2 h，at 37 ℃；The serum sample was diluted in 1∶100 with incubated for 2 h at 37 ℃；The dilution of rabbit-anti-porcine IgG labeled by HRP was diluted in 1∶3000 with incubated for 2 h at 37 ℃；The TMB substrate was added and incubated at 37 ℃ for 15 min and then terminated with stopping solution. The standard of judgment was that the serum sample D_{450 nm} value with S/P≥0.254 was positive, and the sample D_{450 nm} value with S/P≤0.212 was negative. The recombinant antigen had no cross-reaction with antibodies of other five porcine diseases. 70 serum samples collected from pigs which were vaccinated with Ingelvac PRRS MLV were detected by this assay, the D_{450 nm} value of which were higher than 0.85. The results demonstrated that the establishment indirect ELISA method could be used for monitoring PRRSV antibody.

Key words: porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV); recombinant GP5-encoding-epitopes protein; indirect ELISA

陈如敬，吴学敏，车勇良，王隆柏，刘玉涛，严山，魏宏，庄向生，周伦江. 串联表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5表位蛋白间接ELISA方法的建立[J]. 中国畜牧兽医.

CHEN Ru-jing, WU Xue-min, CHE Yong-liang, WANG Long-bai, LIU Yu-tao, YAN Shan, WEI Hong, ZHUANG Xiang-sheng，ZHOU Lun-jiang. Development of an Indirect ELISA Assay for Detecting Antibody to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus with Recombinant GP5-encoding-epitopes Protein[J]. .

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