胰岛素样生长因子-Ⅰ、肝细胞生长因子、转化生长因子-β1、干扰素-γ对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性的影响

中国畜牧兽医

胰岛素样生长因子-Ⅰ、肝细胞生长因子、转化生长因子-β1、干扰素-γ对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性的影响

李莹莹¹，夏小静²，吴云娣²，何伯萍²，闫新武¹，高媛媛¹，王玉平¹，雷连成²

（1.吉林大学动物科学学院，吉林长春 130062；2.吉林大学动物医学学院，吉林长春 130062）

收稿日期:2013-09-28 出版日期:2014-04-20 发布日期:2014-05-27
通讯作者: 雷连成，教授，博士生导师。E-mail：leiliancheng@163.com
作者简介:李莹莹（1988—），女，湖北人，硕士，研究方向：奶牛泌乳生物学。
基金资助:
国家重点基础研究发展计划（“973”计划）资助（2011CB100805）。

Effects of IGF-Ⅰ, HGF, TGF-β1, IFN-γ on Proliferation of Bovine Mammary Epithelial Cells

LI Ying-ying¹, XIA Xiao-jing², WU Yun-di², HE Bo-ping², YAN Xin-wu¹, GAO Yuan-yuan¹, WANG Yu-ping¹, LEI Lian-cheng²

（1.College of Animal Science, Jilin University, Changchun 130062, China；2.College of Veterinary Medicine, Jilin University, Changchun 130062, China）

Received:2013-09-28 Online:2014-04-20 Published:2014-05-27

摘要/Abstract

摘要： 本试验应用组织块培养和差速消化法获取原代奶牛乳腺上皮细胞，免疫荧光鉴定正确后MTT法评价不同浓度的胰岛素样生长因子-Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ，IGF-Ⅰ）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor, HGF）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、干扰素-γ （interferon-γ，IFN-γ）对奶牛乳腺上皮细胞体外增殖的影响。结果表明，IGF-Ⅰ、HGF分别在 10～200和0.1～100 ng/mL对乳腺上皮细胞的增殖呈正相关，而TGF-β1（2.5～100 ng/mL）、IFN-γ（5～160 ng/mL）则剂量依赖性地抑制乳腺上皮细胞增殖。提示，IGF-Ⅰ、HGF均能促进奶牛乳腺上皮细胞的体外增殖，该作用在一定浓度范围内有剂量依赖性；TGF-β1、IFN-γ对乳腺上皮细胞的增殖作用出现剂量抑制效应。

关键词: 细胞因子; 乳腺上皮细胞; 原代培养; 细胞增殖

Abstract: This experiment was conducted to investigate the regulation of insulin-like growth factor-Ⅰ（IGF-Ⅰ）, hepatocyte growth factor （HGF）, transforming growth factor-β1 （TGF-β1） and interferon-γ （IFN-γ） in the growth of bovine mammary epithelial cells in vitro.The bovine mammary epithelial cells were isolated by explant culture technique and differential adhesion method and identified by immunochemistry.The effect of cytokines regulating the growth of bovine mammary epithelial cells in different concentrations was measured by MTT.The results showed that when the concentrations of IGF-Ⅰ and HGF were 10 to 200 and 0.1 to 100 ng/mL, respectively, the growth of bovine mammary epithelial cells increased. While when the concentrations of TGF-β1 and IFN-γ were 2.5 to 100 and 5 to 160 ng/mL, respectively, the growth of bovine mammary epithelial cells decreased in a dose-dependent manner.These results indicated that IGF-Ⅰ and HGF could upregulate the proliferation of bovine mammary epithelial cells in vitro in a dose-dependent manner.TGF-β1 and IFN-γ could inhibit the proliferation of bovine mammary epithelial cells in vitro.

Key words: cytokine; mammary epithelial cells; primary culture; cell proliferation

李莹莹，夏小静，吴云娣，何伯萍，闫新武，高媛媛，王玉平，雷连成. 胰岛素样生长因子-Ⅰ、肝细胞生长因子、转化生长因子-β1、干扰素-γ对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性的影响[J]. 中国畜牧兽医.

LI Ying-ying, XIA Xiao-jing, WU Yun-di, HE Bo-ping, YAN Xin-wu, GAO Yuan-yuan, WANG Yu-ping, LEI Lian-cheng. Effects of IGF-Ⅰ, HGF, TGF-β1, IFN-γ on Proliferation of Bovine Mammary Epithelial Cells[J]. .

参考文献

1 丁旭娜, 王凤龙, 丁玉林, 等. 奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞的体外培养与鉴定［J］. 黑龙江畜牧兽医, 2012, 5: 1～5.
2 刘畅, 赵锋, 李庆章. 不同泌乳相关激素和生长因子对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响［J］. 中国畜牧兽医, 2012, 39（5）: 102～106.
3 何丽洁, 王汉民, 杨桂涛, 等. 人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究［J］. 细胞与分子免疫学杂志, 2007, 23（3）: 275～276.
4 何伯萍, 邢艳萍, 韩东, 等. IGF-Ⅰ对奶牛乳腺上皮细胞合成乳脂、乳蛋白的影响［J］. 中国兽医学报, 2012, 32（8）: 1231～1234.
5 李庆章, 林叶. 牛乳腺发育和泌乳生长因子的调节［A］. 全国反刍动物第三次学术会议论文摘要汇编［C］.2004.
6 Accornero P, Luvarà S, Favole A, et al.Biological role of the HGF/MET ligand/receptor couple in bovine mammary epithelial cells［J］. Veterinary Research Communications, 2007, 31: 161～164.
7 Burgos S A, Cant J P. IGF-1 stimulates protein synthesis by enhanced signaling through mTORC1 in bovine mammary epithelial cells［J］. Domestic Animal Endocrinology, 2010, 38（4）: 211～221.
8 Chen H H, Zhao S, Song J G. TGF-β1 suppresses apoptosis via differential regulation of MAP kinases and ceramide production［J］. Cell Death & Differentiation, 2003, 10（5）: 516～527.
9 Curi R A, de Oliveira H N, Silveira A C, et al. Effects of polymorphic microsatellites in the regulatory region of IGF-1 and GHR on growth and carcass traits in beef cattle［J］. Animal Genetics, 2005, 36（1）: 58～62.
10 Imagawa W, Pedchenko V K, Helber J, et al. Hormone/growth factor interactions mediating epithelial/stromal communication in mammary gland development and carcinogenesis［J］. The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology, 2002, 80（2）: 213～230.
11 Petersson S, Bylander A, Yhr M, et al. S100A7 （Psoriasin）, highly expressed in ductal carcinoma in situ （DCIS）, is regulated by IFN-γ in mammary epithelial cells［J］. BMC Cancer, 2007, 7（1）: 205.
12 Sasaki M, Nishio M, Sasaki T, et al. Identification of mouse mammary hibroblast-derived mammary growth factor as hepatocyte growth-factor［J］. Biochemical and Biophysical Research Communications, 1994, 199（2）: 772～779.
13 Sasaki M, Enami J. Mammary fibroblast-derived hepatocyte growth factor and mammogenic hormones stimulate the growth of mouse mammary epithelial cells in primary culture［J］. Endocrine Journal, 1999, 46（3）: 359～366.
14 Soriano J V, Pepper M S, Nakamura T, et al. Hepatocyte growth factor stimulates extensive development of branching duct-like structures by cloned mammary gland epithelial cells［J］. Journal of Cell Science, 1995, 108: 413～430.
15 Sureshbabu A, Tonner E, Flint D J. Insulin-like growth factor binding proteins and mammary gland development［J］. International Journal of Developmental Biology, 2011, 55（7）: 781～789.
16 Takahata Y, Takada H, Nomura A, et al. Detection of interferon-γ-inducible chemokines in human milk［J］. Acta Paediatrica, 2003, 92（6）: 659～665.
17 Wu W J, Lee C F, Hsin C H, et al. TGF-β inhibits prolactin-induced expression of β-casein by a Smad3-dependent mechanism［J］. Journal of Cellular Biochemistry, 2008, 104（5）: 1647～1659.
18 Zhao K, Liu H Y, Zhou M M, et al. Establishment and characterization of a lactating bovine mammary epithelial cell model for the study of milk synthesis［J］. Cell Biology International, 2010, 34（7）: 717～721.

[1]	李灿, 李楚楚, 曾维, 张宁, 纪春晓, 陈韬. 猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2414-2426.
[2]	邵永斌, 郑一闯, 张竞怡, 魏琳颖, 田勇, 孙国结, 刘雨然, 罗燕, 谷新利. 益母草碱对LPS诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 2149-2155.
[3]	甄珍, 王梅, 王轶敏, 胡德宝, 张林林, 李新, 郭益文, 郭宏, 丁向彬. RNA甲基化转移酶METTL3对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1025-1036.
[4]	田书岳, 神英超, 王希生, 王敏, 伊敏娜, 才文道力玛, 陶力, 赵毕力格, 芒来, 格日乐其木格. 蒙古马胎儿成纤维细胞永生化细胞体系建立的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 46-57.
[5]	潘思尧, 张丹丹, 刘权辉, 王国栋, 吕丹薇, 黄奔. 抑制miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞泌乳功能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 58-66.
[6]	王学方, 归荣, 陈功义, 王伟, 张红英, 王学兵, 李晓. 连花柴芩可溶性粉对鸡风热犯肺证的临床试验研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3610-3621.
[7]	王楠, 冯保亮, 郑云曦, 黄雷, 王悦, 徐松松, 张秀玲, 刘志国, 李奎, 牟玉莲. WIP1基因对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其在小鼠不同生长阶段的表达[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 2869-2879.
[8]	周雅, 张禾垟, 刘琳玲, 李浩东, 郑军军, 王桂武. 梅花鹿成纤维细胞因子受体2基因多态性及其与茸重性状的关联分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3006-3014.
[9]	于凯, 赵玉芬, 翁钰, 王琴, 郝绍瑜, 于泊洋, 杜晨光, 苏布登格日勒, 李海军. 双氢睾酮对小鼠卵泡颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素表达的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3036-3043.
[10]	蔡萌, 朱晓艳, 王梦玲, 刘子豪, 熊本海, 杨亮. 金黄色葡萄球菌处理对奶牛乳腺上皮细胞外泌体表征的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 3091-3098.
[11]	刘雨然, 杨慧莹, 朱妍, 王蒙蒙, 孙国结, 张梦圆, 王燕, 高嘉豪, 连科迅, 谷新利. “乳炎宁”水提物的抗炎作用研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1879-1887.
[12]	张元锌, 王闫宇, 云艳虹, 陈俊朴, 石惠宇, 王学梅. 山羊乳腺上皮细胞氧化损伤模型的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1917-1925.
[13]	陈毓, 陈晓兰, 杨海峰, 罗军, 张婷, 左海萍, 郑义. 五味止痢合剂对大肠杆菌致小鼠腹泻的治疗作用[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 2001-2009.
[14]	邱树磊, 陈晓兰, 杨海峰, 陈玉库, 胡元亮, 高永旭, 武彩红. 硒化大蒜多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1144-1152.
[15]	银慧慧, 童艳梅, 曾雪颜, 卢光强, 赵武, 姜源明, 刘伟. 桃金娘果多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 731-737.