水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达

中国畜牧兽医

水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达

刘红娜¹，王文玉¹，张云¹，杨宇航¹，郝俊伟¹，时坤²，李健明²，杜锐²

(1.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春 130118；2.吉林农业大学中药材学院，吉林长春 130118)

收稿日期:2013-11-19 出版日期:2014-04-20 发布日期:2014-05-27
通讯作者: 杜锐（1971—），男，吉林人，教授，博士生导师，从事经济动物疫病学研究。E-mail: durui71@126.com
作者简介:刘红娜（1987—），女，新疆人，硕士生，研究方向：经济动物疫病学。
基金资助:
国家自然科学基金（31272565）。

Segmented Expression of Aleutian Disease Virus (ADV) NS1 Gene Fragment in E.coli

LIU Hong-na¹, WANG Wen-yu¹, ZHANG Yun¹, YANG Yu-hang¹, HAO Jun-wei¹, SHI Kun², LI Jian-ming², DU Rui²

(1.College of Animal Science and Technology, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China; 2.College of Chinese Medicinal Material, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

Received:2013-11-19 Online:2014-04-20 Published:2014-05-27

摘要/Abstract

摘要： 利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒（aleutian disease virus，ADV）NS1基因后，设计3对特异性引物，以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段，分别命名为L1N1、L2N2、L3N3基因，构建克隆质粒pMD18-T-L1N1、pGEM-T-L2N2及pMD18-T-L3N3。经测序鉴定正确后，将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的3个NS1基因片段连接至经相同双酶切的pGEX-4T-1原核表达载体，并转化入表达宿主菌BL21（DE3）感受态细胞，利用IPTG进行诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明，成功构建了3段重组原核表达质粒pGEX-4T-L1N1、pGEX-4T-L2N2、pGEX-4T-L3N3，SDS-PAGE结果显示分别表达出大小约57、51、44 ku的目的条带，与预期相符。Western blotting 进一步证实获得的3种蛋白能被ADV阳性血清识别，具有反应原性。本试验首次对ADV NS1基因在大肠杆菌中进行分段表达，为后续研制ADV的亚单位疫苗奠定基础。

关键词: 水貂阿留申病毒NS1基因; 大肠杆菌; 分段表达

Abstract: We predicted the non-structural protein NS1 of aleutian disease virus (ADV) by DNAStar software Protean module. Then three fragments of NS1 gene named as L1N1, L2N2 and L3N3 were amplified using the laboratory saved NS1-pMD18-T plasmid as template. We constructed three cloning plasmids pMD18-T-L1N1, pGEM-T-L2N2 and pMD18-T-L3N3. After identification, they were linked to pGEX-4T-1 prokaryotic expression vector by two enzymes EcoRⅠ and SalⅠ, respectively, and transformed into E.coli BL21 (DE3) inducing with IPTG. The expressed recombinant proteins were analyzed by SDS-PAGE and Western blotting. The results showed that three recombination prokaryotic expression plasmids pGEX-4T-L1N1, pGEX-4T-L2N2 and pGEX-4T-L3N3 were successfully constructed and the SDS-PAGE results showed that three purpose proteins were expressed about 57, 55 and 44 ku as expected. Furthermore, the proteins were recognized by ADV positive sera and had the reactionogenicity. In the study, the NS1 gene of ADV was expressed segmentedly in E.coli for the first time and laid a foundation for the further study of ADV subunit vaccines.

Key words: aleutian disease virus NS1 gene; E.coli; segmented expression

刘红娜，王文玉，张云，杨宇航，郝俊伟，时坤，李健明，杜锐. 水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达[J]. 中国畜牧兽医.

LIU Hong-na, WANG Wen-yu, ZHANG Yun, YANG Yu-hang, HAO Jun-wei, SHI Kun, LI Jian-ming, DU Rui. Segmented Expression of Aleutian Disease Virus (ADV) NS1 Gene Fragment in E.coli[J]. .

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