京海黄鸡钠氢离子交换泵1基因实时荧光定量PCR标准曲线的建立

中国畜牧兽医

京海黄鸡钠氢离子交换泵1基因实时荧光定量PCR标准曲线的建立

陈学森¹，王金玉¹，张跟喜¹，张涛¹，唐莹¹，施会强²

（1.江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，江苏扬州 225009；2.江苏省京海禽业集团，江苏南通 226100）

收稿日期:2013-08-19 出版日期:2014-02-20 发布日期:2014-03-27
通讯作者: 王金玉（1952—），男，江苏人，教授，博士生导师。E-mail: jywang@yzu.edu.cn
作者简介:陈学森（1990—），男，江苏人，硕士生，研究方向：分子遗传育种。
基金资助:
江苏省高校自然科学基金(12KJB230003)；国家肉鸡产业技术体系(nycytx-42-G1-05)；江苏省高校重点实验室资助。

Establishment of Standard Curves for Detection of Na⁺/H⁺ Exchanger 1 Gene in Jinghai Yellow Chicken Using Real-time PCR

CHEN Xue-sen¹, WANG Jin-yu¹, ZHANG Gen-xi¹, ZHANG Tao¹, TANG Ying¹, SHI Hui-qiang²

(1.Key Laboratory for Animal Genetics, Breeding,Reproduction and Molecular Design of Jiangsu Province, Yangzhou 225009，China；2.Jiangsu Poultry Industry Group，Nantong 226100，China)

Received:2013-08-19 Online:2014-02-20 Published:2014-03-27

摘要/Abstract

摘要： 为阐明钠氢离子交换泵1（Na⁺/H⁺ exchanger 1,NHE1）基因在京海黄鸡组织表达和生理功能，依据GenBank登录的NHE1基因的核苷酸序列（登录号：DQ256198）设计特异性引物, 经RT-PCR技术从京海黄鸡组织样中扩增和克隆了上述因子的204 bp核苷酸片段。测序鉴定后, 将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板, 通过实时荧光定量PCR方法, 建立了它们各自的标准曲线及直线回归方程，得到了相关系数R² = 0. 9903、回归方程为y = - 3.4643 x + 35.9000的标准曲线,成功构建了NHE1基因的标准质粒和标准曲线,为京海黄鸡组织中NHE1 mRNA 水平的定量检测提供了必要的技术手段。

关键词: 钠氢离子交换泵1; 京海黄鸡; 重组质粒; 表达; 实时荧光定量PCR

Abstract: The purpose of this study was to elucidate the Na⁺/H⁺ exchanger 1 （NHE1） gene expression and its normal physiological functions. The primers were designed and synthesized based on the nucleotide sequences of NHE1 gene available in GenBank. The 204 bp fragments were amplified by RT-PCR from mRNA of Jinghai Yellow chickens, and then the fragments were cloned and sequenced. The recombinant plasmids were diluted by 10-fold serial and used as the Real-time PCR standard templates. The constructed standard curve had a relative coefficient R² = 0.9903 and the regressing equation:y =-3.4643x+35.9000 suggested it was successful, and they provided powerful tools for quantification of mRNA of NHE1 gene in Jinghai Yellow chickens.

Key words: Na⁺/H⁺ exchanger 1; Jinghai Yellow chicken; recombinant plasmid; expression; Real-time PCR

陈学森，王金玉，张跟喜，张涛，唐莹，施会强. 京海黄鸡钠氢离子交换泵1基因实时荧光定量PCR标准曲线的建立[J]. 中国畜牧兽医.

CHEN Xue-sen, WANG Jin-yu, ZHANG Gen-xi, ZHANG Tao, TANG Ying, SHI Hui-qiang. Establishment of Standard Curves for Detection of Na⁺/H⁺ Exchanger 1 Gene in Jinghai Yellow Chicken Using Real-time PCR[J]. .

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