猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

›› 2014, Vol. 41 ›› Issue (10): 33-37.

猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

徐天¹, 石达¹, 陈建飞¹, 谷凤丽^1,2, 时洪艳¹, 张鑫¹, 冯力^1,2

1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室, 黑龙江哈尔滨 150001;
2. 东北农业大学生命科学学院, 黑龙江哈尔滨 150030

收稿日期:2014-05-12 出版日期:2014-10-20 发布日期:2014-10-29
通讯作者: 冯力 E-mail:fengli_h@163.com
作者简介:徐天(1988－),女,山东人,硕士生,研究方向:兽医微生物学及分子生物学。
基金资助:
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(0302013002);猪流行性腹泻病毒纤突蛋白与宿主蛋白相互作用机制研究;国家自然基金项目“猪流行性腹泻病毒N蛋白核定位特性及其对宿主细胞周期影响”(31172350)

Construction and Identification of Yeast Two-hybrid cDNA Library of Porcine Intestinal Epithelial Cells

XU Tian¹, SHI Da¹, CHEN Jian-fei¹, GU Feng-li^1,2, SHI Hong-yan¹, ZHANG Xin¹, FENG Li^1,2

1. Division of Swine Infectious Diseases, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China;
2. College of Life Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China

Received:2014-05-12 Online:2014-10-20 Published:2014-10-29

摘要/Abstract

摘要： 为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA(ds-cDNA),通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×10⁸ CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0 kb,平均长度约为1.1 kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。

关键词: 猪腹泻病毒; 猪小肠上皮细胞; 酵母双杂交; cDNA文库

Abstract: In order to study the molecular mechanism of invasion and virulence of the swine intestinal virus systematically,we constructed a porcine intestinal epithelial cells (IEC) cDNA yeast two-hybrid library. Taking advantage of RNeasy Min Kit,total cellular RNA was extracted from cultured porcine IEC,after reverse transcription,synthetise double stranded cDNA by the SMART technology,porcine IEC yeast cDNA library were constructed with homologous recombination. The results showed,library titer was 8.4×10⁸ CFU/mL,the inserted fragment of ds-cDNA was 0.5 to 2.0 kb,the average length up to 1.1 kb with a high library recombination rate. This library could be used for screening intestinal host proteins which were interacted with virus proteins,provide reference for the further study of the pathogenesis of the virus,and provide basement for the development of effective drug or vaccine.

Key words: porcine diarrhea virus; porcine intestinal epithelial cells; yeast two-hybrid; cDNA library

中图分类号:

徐天, 石达, 陈建飞, 谷凤丽, 时洪艳, 张鑫, 冯力. 猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定[J]. , 2014, 41(10): 33-37.

XU Tian, SHI Da, CHEN Jian-fei, GU Feng-li, SHI Hong-yan, ZHANG Xin, FENG Li. Construction and Identification of Yeast Two-hybrid cDNA Library of Porcine Intestinal Epithelial Cells[J]. , 2014, 41(10): 33-37.

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