ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.03.007

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (3): 667-672.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.03.007

ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

王鑫^1,2, 石达², 董慧², 曹丽艳², 陈建飞², 时洪艳², 张鑫², 冯力^1,2

1. 东北农业大学生命科学学院, 哈尔滨 150030;
2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室, 哈尔滨 150001

收稿日期:2016-09-06 出版日期:2017-03-20 发布日期:2017-03-21
通讯作者: 冯力 E-mail:fengli_h@163.com
作者简介:王鑫(1990-),女,黑龙江哈尔滨人,硕士生,研究方向:兽医微生物学及分子生物学,E-mail:wangxin900104@126.com
基金资助:
黑龙江省科研机构创新能力提升专项（YC2015D011）；"十二五"农村领域国家科技计划课题（2015BAD12B02）

Construction and Characterization of the Yeast Two-hybrid cDNA Library of ST Cells

WANG Xin^1,2, SHI Da², DONG Hui², CAO Li-yan², CHEN Jian-fei², SHI Hong-yan², ZHANG Xin², FENG Li^1,2

1. College of Life Scicnce, Northcast Agricultural University, Harbin 150030, China;
2. Division of Swine Infectious Discases, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China

Received:2016-09-06 Online:2017-03-20 Published:2017-03-21

摘要/Abstract

摘要：

为了筛选与猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白，深入研究病毒入侵及致病的分子机制，本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA，反转录合成cDNA第一链之后，通过SMART技术合成了双链cDNA，并利用同源重组的方法，构建了ST细胞的酵母cDNA文库。结果显示，文库滴度为8.1×10⁸ CFU/mL，插入的双链cDNA片段大小为250~1 000 bp，平均大小约为500 bp，文库的重组率为96%。此文库可用于筛选与病毒相互作用的ST细胞宿主蛋白，为进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础。

关键词: 猪细小病毒; 酵母双杂交; ST细胞; cDNA文库

Abstract:

To seek out proteins interact with VP2 structural protein of porcine parvovirus (PPV) in ST cell and study the molecular mechanisms of viral infection and pathogenicity, a ST cDNA yeast hybrid library was created. Firtly,the total RNA of ST was extracted using RNeasy Min Kit,and double strands cDNA was synthesized by SMART technique. Then, the ST cDNA library was successfully created by homologous recombination in yeast, the titer was 8.1×10⁸ CFU/mL, the inserts varied from 250 to 1 000 bp,the average of inserted fragments was about 500 bp,and the recombination rate was 96%.These datas indicated that the yeast two-hybrid cDNA library was successfully constructed and might be useful for screening the host proteins interacting with structure protein of PPV.

Key words: porcine parvovirus (PPV); yeast two-hybird; ST cell; cDNA library

中图分类号:

Q782

王鑫, 石达, 董慧, 曹丽艳, 陈建飞, 时洪艳, 张鑫, 冯力. ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(3): 667-672.

WANG Xin, SHI Da, DONG Hui, CAO Li-yan, CHEN Jian-fei, SHI Hong-yan, ZHANG Xin, FENG Li. Construction and Characterization of the Yeast Two-hybrid cDNA Library of ST Cells[J]. , 2017, 44(3): 667-672.

参考文献

[1] Zhang H, Huang Y, Du Q, et al. Porcine parvovirus infection induces apoptosis in PK-15 cells through activation of p53 and mitochondria-mediated pathway[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2015, 456(2):649-655.
[2] Gava D, Souza C K, Schaefer R, et al. A TaqMan-based Real-time PCR for detection and quantification of porcine parvovirus 4[J]. Journal of Virological Methods, 2015, 219:14-17.
[3] 吴云飞,朱玲,徐志文,等. 猪细小病毒PK-15细胞适应株的培育及增值特性[J]. 病毒学报,2013,29(4):357-363.
[4] Xu Y G, Cui L C, Wang H W, et al. Characterization of the capsid protein VP2 gene of a virulent strain NE/09 of porcine parvovirus isolated in China[J]. Research in Veterinary Science, 2012, 94(2):219-224.
[5] Wang R N, Wang Y B, Geng J W, et al. Enhancing immune responses to inactivated porcine parvovirus, oil emulsion vaccine by co-inoculating porcine transfer factor in mice[J]. Vaccine, 2012, 30(35):5246-5252.
[6] Mengeling W L, Lager K M, Vorwald A C. The effect of porcine parvovirus and porcine reproductive and respiratory syndrome virus on porcine reproductive performance[J]. Animal Reproduction Science, 2000, 60-61(3):199-210.
[7] 仇铮,任晓峰,崔尚金,等. 猪细小病毒的致病机制与防控措施[J]. 世界华人消化杂志,2013,21(1):66-70.
[8] Xiao C T, Gerber P F, Giménez-Lirola L G, et al. Characterization of porcine parvovirus type 2(PPV2) which is highly prevalent in the USA[J]. Veterinary Microbiology, 2013, 161(3-4):325-330.
[9] 王晓玲. 猪转铁蛋白受体与PPV-VP2相互作用的初步研究[D].北京:中国农业科学院, 2015.
[10] Fields S, Song O. A novel genetic system to detect protein protein interactions[J]. Nature, 1989, 340(6230):245-246.
[11] 陈泽良, 高婷, 张部昌,等. 应用酵母双杂交技术筛选与埃博拉病毒VP24、VP35、VP40蛋白相互作用的宿主蛋白[J]. 生物技术通讯, 2016, 27(3):308-313.
[12] Ito T,Chiba T,Ozawa R,et al. A comprehensive two-hybrid analysis to explore the yeast protein interactome[J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2001,98(8):4569-4574.
[13] Bailer S M, Haas J. Connecting viral with cellular interactomes[J]. Current Opinion in Microbiology, 2009, 12(4):453-459.
[14] Dyer M D, Neff C, Dufford M,et al.The human-bacterial pathogen protein interaction networks of Bacillus anthracis, Francisella tularensis, and Yersinia pestis[J]. PLoS One, 2010, 5(8):e12089.
[15] 郑立双,李向楠,孙城涛,等. 酵母双杂交技术及应用的研究进展[J]. 中国畜牧兽医,2013,40(9):105-108.
[16] Auerbach D,Fetchko M,Stagljar L. Proteomic approaches for generating comprehensive protein interaction maps[J].Drug Discov Today,2003,2(3):85-92.
[17] Rain J C, Selig L, De Reuse H, et al. The protein-protein interaction map of Helicobacter pylori[J]. Nature, 2001, 409(6817):211-215.
[18] 张佩景,李慧艳,潘欣,等.酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B相互作用的蛋白质[J].生物技术通讯,2005,16(6):612-614.
[19] Liu J L, Cheng C. Study on interaction between SARS-CoV N and MAP19[J]. Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology, 2009, 25(9):777-779.
[20] Wei W Y, Li H C, Chen C Y, et al. SARS-CoV nucleocapsid protein interacts with cellular pyruvate kinase protein and inhibits its activity[J]. Archives of Virology, 2012, 157(4):635-645.
[21] 徐天, 石达, 陈建飞,等. 猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(10):33-37.
[22] Oraveerakul K, Choi C S, Molitor T W. Detection of porcine parvovirus using nonradioactive nucleic acid hybridization[J]. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 1990, 2(2):85-91.
[23] 平玲,魏圆圆,王家敏,等. ST细胞库的建立及其生物学特性鉴定[J]. 山西农业科学,2013,41(8):804-807.
[24] 李珣, 陈思宇, 胡传活,等. PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定[J]. 南方农业学报, 2016, 47(5):726-730.
[25] Sambrook J,Russell D W. Molecular Cloning:A Laboratory Manal[M]. The 3rd. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001.
[26] 彭建平,刘嘉,谌南辉,等. 鸡法氏囊B细胞酵母双杂交cDNA文库的构建[J]. 江西农业大学学报,2009,31(1):27-30.

ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

Construction and Characterization of the Yeast Two-hybrid cDNA Library of ST Cells

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	欧云文, 潘琴, 汪洋, 代军飞, 任绍科, 张洋, 张杰. 猪细小病毒6型ORF2基因的截短表达及多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(6): 2487-2495.
[2]	但一昕, 向华, 张焕容, 杨璐, 任玉鹏, 徐颂为, 何翃闳, 朱江江. 羊口疮病毒129蛋白互作宿主蛋白的筛选与C1QBP基因的克隆分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 1-14.
[3]	张鑫杰, 薛少华, 吕紫欣, 黄喜荣, 陈羽璇, 范克伟, 杨小燕, 戴爱玲. 闽粤地区PPV7与PCV2的混合感染调查及PPV7 Cap基因的遗传变异分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2291-2297.
[4]	邱润辉, 关飞虎, 陶婷婷, 李佳, 赵天艺, 邓兴梅, 史超, 孙志华, 张辉. 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的亚细胞定位及与宿主细胞互作蛋白的筛选[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1438-1448.
[5]	崔帅, 王洋, 郭晓宇, 陈世钰, 蒋亚君, 庞忠宝, 黄建新, 孟凡峰, 姜一曈, 朱鸿飞, 贾红. 利用酵母双杂交技术筛选和鉴定非洲猪瘟病毒E120R蛋白的互作宿主蛋白[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4139-4149.
[6]	代国栋, 闫鸿斌, 李立, 付宝权, 贾万忠. 人兽共患寄生虫病候选疫苗分子筛选方法研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(6): 2177-2187.
[7]	晏云涛, 吕瑞青, 石莲琴, 杨建发, 段纲, 邹丰才, 项勋. 紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因筛选和分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(9): 2347-2357.
[8]	卢恒, 谢芝勋, 谢丽基, 黄莉, 黄娇玲, 王盛, 张艳芳, 曾婷婷, 范晴, 罗思思, 谢志勤, 邓显文. 禽呼肠孤病毒σA基因酵母双杂交诱饵载体的构建与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(3): 847-853.
[9]	刘立兵, 王建昌, 经美, 王金凤, 袁万哲. 猪细小病毒重组酶聚合酶扩增快速检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(11): 3320-3326.
[10]	王念, 陈玉明, 张礼洲, 高立, 卢珍, 高玉龙, 王永强, 高宏雷, 刘长军, 崔红玉, 王笑梅, 祁小乐. 传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选[J]. , 2015, 42(2): 317-323.
[11]	李兴玉，李金海，林毅，曹冶，罗丹丹，廖党金，魏甬，李江凌，于吉锋，张先惠. 猪细小病毒疫苗株NS1基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(7): 21-26.
[12]	迟延彬，石达，朱庆贺，陈建飞，时洪艳，张鑫，李长龙，韩斅，刘宁，赵鑫，冯力. Vero E6细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(3): 124-127.
[13]	王隆柏，张志刚，苏永裕，车勇良，吴学敏,周伦江. 5种猪病多重PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(2): 21-25.
[14]	徐天, 石达, 陈建飞, 谷凤丽, 时洪艳, 张鑫, 冯力. 猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定[J]. , 2014, 41(10): 33-37.
[15]	陈玉明，张礼洲，任宪刚，高立，秦立廷，高玉龙，王永强，高宏雷，王笑梅，祁小乐. 不同毒力传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2014, 41(1): 30-34.