MDCC-MSB1细胞酵母双杂交cDNA表达文库的构建与鉴定

›› 2013, Vol. ›› Issue (5): 22-25.

MDCC-MSB1细胞酵母双杂交cDNA表达文库的构建与鉴定

崔鹏鹏, 高宏雷, 李凯, 高立, 高玉龙, 祁小乐, 王笑梅

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽免疫抑制病研究室, 兽医生物技术国家重点实验室, 黑龙江哈尔滨 150001

收稿日期:2012-10-11 出版日期:2013-05-20 发布日期:2013-05-27
通讯作者: 王笑梅(1962-),女,黑龙江人,博士,研究员,研究方向:动物传染病及其病原分子流行病学。E-mail:xmw@hvri.ac.cn E-mail:xmw@hvri.ac.cn
作者简介:崔鹏鹏(1988-),女,山东人,硕士生,研究方向:动物传染病及其病原分子流行病学。
基金资助:
国家自然科学基金项目(30901083);现代农业产业技术体系建设专项(nycytx-42-G3-01)。

Construction and Characterization of Yeast Two-hybrid cDNA Expression Library of MDCC-MSB1

CUI Peng-peng, GAO Hong-lei, LI Kai, GAO Li, GAO Yu-long, QI Xiao-le, WANG Xiao-mei

State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Division of Avian Infectious Diseases, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China

Received:2012-10-11 Online:2013-05-20 Published:2013-05-27

摘要/Abstract

摘要： 提取生长状态良好的MDCC-MSB1细胞的mRNA,以5'端标记有生物素的Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,滴度为1×10⁵ CFU/mL,文库总容量为1.1×10⁶ CFU,平均插入片段长度为1190 bp,阳性重组率为100%。入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库,平均滴度为1×10⁵ CFU/mL,文库总容量为1.2×10⁶ CFU,平均插入片段长度为1087 bp,重组率为100%。构建的表达文库具有较高的质量,为研究鸡传染性贫血病毒的受体及其细胞嗜性奠定了基础。

关键词: MDCC-MSB1细胞; cDNA文库; 鸡传染性贫血; 酵母双杂交

Abstract: To construct cDNA expressing library using MDCC-MSB1 cells in a good state, cDNA were synthesized using biotin-conjugated Oligo (dT) primer in the 5'end. The doublestrand cDNA was ligated to adapter and passed the cDNA size fractionation columns. The cDNA entry library was constructed by BP recombination. The library had a high titer of 1?10⁵ CFU/mL, and contained a total clones of 1.1?10⁶ CFU with an average inserts size was about 1190 bp. The constructed cDNA expression library by LR recombination had a titer of 1?10⁵ CFU/mL and contained total clones of 1.2?10⁶ CFU, with an average inserts size of 1087 bp. The cDNA expression libraries would be a valuable resource for identification of cell receptors of CIAV on the MDCC-MSB1 cells and its cellular tropism.

Key words: MDCC-MSB1 cell lines; cDNA library; chicken infectious anemia; yeast two-hybrid

中图分类号:

Q786

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