猪圆环病毒2型ORF2基因的定点突变及其真核表达载体的构建

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (2): 99-102.

猪圆环病毒2型ORF2基因的定点突变及其真核表达载体的构建

张艳萍，苏丹萍，贺东生

（华南农业大学兽医学院广东省人畜共患病重点实验室，广东广州 510642）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-02-20 发布日期:2011-02-20
通讯作者: 贺东生

Site-directed Mutagenesis of PCV2 ORF2 Gene Based on Overlap Extension PCR and Construction of Eukaryotic Expression Vector

ZHANG Yan-ping,SU Dan-ping,ZHANG Yan-ping,SU Dan-ping,HE Dong-sheng

（Guangdong Key Laboratory of Zoonosis,College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China）

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-02-20 Published:2011-02-20
Contact: HE Dong-sheng

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因序列设计并合成引物，采用重叠延伸PCR（splice overlap extension PCR,SOE-PCR）定点诱变技术对ORF2基因进行定点突变。DNA测序结果表明，ORF2基因片段的372—378 bp处的碱基由TCTAGAT突变为ATTGGAT，从而破坏酶切位点XbaⅠ，成功获得ORF2的突变基因片段。进而将其连接到腺病毒真核表达载体pAD5-Blue中，成功构建真核表达载体，并获得PCV2的Cap蛋白表达产物，为PCV2新型疫苗研究奠定了重要基础。

关键词: 猪圆环病毒2型; ORF2基因; 重叠延伸PCR; pAD5-Blue; Cap蛋白

Abstract: Based on the ORF2 sequences of PCV2 available in GenBank,two pairs of primers were designed and site-directed mutagenesis method based on overlap extension PCR was used to introduce mutations in the ORF2 fragment.DNA sequencing showed that TCTAGAT of 372—378 bp sites had been changed into TATAACT from mutagenesis, the endonuclease sites XbaⅠwas destroyed, site-directed mutagenesis was successfully implemented.Eukaryotic expression vector（pAD5-Blue） was constructed and expressed biological activity protein of Cap.It laid the foundation for further study and played a great role for the PCV2 subunit vaccine research.

Key words: PCV2; ORF2 gene; overlap extension PCR; pAD5-Blue; protein of Cap

中图分类号:

张艳萍;苏丹萍;贺东生. 猪圆环病毒2型ORF2基因的定点突变及其真核表达载体的构建[J]. , 2011, 38(2): 99-102.

ZHANG Yan-ping;SU Dan-ping;ZHANG Yan-ping;SU Dan-ping;HE Dong-sheng. Site-directed Mutagenesis of PCV2 ORF2 Gene Based on Overlap Extension PCR and Construction of Eukaryotic Expression Vector[J]. , 2011, 38(2): 99-102.

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