抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (12): 96-99.

抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析

宫晓炜, 郑福英, 蔺国珍, 曹小安, 王光华, 周继章, 才学鹏

中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部兽医公共卫生重点开放实验室,甘肃兰州 730046

收稿日期:2011-04-16 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-12-20 发布日期:2011-12-20
通讯作者: 周继章, 才学鹏

Construction of Eukaryotic Expression Vector and Sequence Analysis of Antimicrobial Peptide Gene Shiva 1a

GONG Xiao-wei, ZHENG Fu-ying, LIN Guo-zhen, CAO Xiao-an, WANG Guang-hua, ZHOU Ji-zhang, CAI Xue-peng 

State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Veterinary Public Health of the Ministry of Agriculture,Lanzhou Veterinary Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046, China

Received:2011-04-16 Revised:1900-01-01 Online:2011-12-20 Published:2011-12-20

摘要/Abstract

摘要： 为了探讨天蚕类抗菌肽在动物早期抗感染过程中的作用机理,本研究以Shiva 1a基因的成熟肽为模板设计4条引物,利用重叠延伸PCR技术获得目的基因,并在C端添加6×His的标签。将此序列与真核表达载体pIRES₂-EGFP进行重组,构建pIRES₂-EGFP-Shiva 1a重组表达质粒,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染将重组质粒转染到CHO-K1细胞,荧光显微镜观察其表达情况。通过生物信息学软件对抗菌肽Shiva 1a的二级结构和三级结构进行预测分析。其结果为进一步研究Shiva 1a的抗菌活性和在动物抗病育种方面的应用奠定了基础。

关键词: 抗菌肽; Shiva 1a; 真核表达; 序列分析

Abstract: To explore the effect mechanism of cecropin-class lytic peptide at early stage of infection. The mat peptide of Shiva 1a was amplified by overlap extension PCR and the C-terminus contained 6×His-marker. The gene sequence were recombinant with eukaryotic expression vector pIRES₂-EGFP. After being identified by restriction enzyme digestion and sequencing, the recombinant plasmid pIRES₂-EGFP-Shiva 1a was transfected into CHO-K1 cells by liposomes. The expression of the the recombinant plasmid pIRES₂-EGFP-Shiva 1a was observed by fluorescence microscope. At the same time, the secondary structure and 3D structure were predicted by bioinformatics tools. The results lay the foundation in research of antimicrobial activities and applications of the antimicrobial peptide Shiva 1a in breeding for disease resistance of animals.

Key words: antimicrobial peptide; Shiva 1a; eukaryotic expression; sequence analysis

中图分类号:

宫晓炜;郑福英;蔺国珍;曹小安;王光华;周继章;才学鹏. 抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析[J]. , 2011, 38(12): 96-99.

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