抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (12): 96-99.

抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析

宫晓炜, 郑福英, 蔺国珍, 曹小安, 王光华, 周继章, 才学鹏

中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 农业部兽医公共卫生重点开放实验室,甘肃兰州 730046

收稿日期:2011-04-16 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-12-20 发布日期:2011-12-20
通讯作者: 周继章, 才学鹏

Construction of Eukaryotic Expression Vector and Sequence Analysis of Antimicrobial Peptide Gene Shiva 1a

GONG Xiao-wei, ZHENG Fu-ying, LIN Guo-zhen, CAO Xiao-an, WANG Guang-hua, ZHOU Ji-zhang, CAI Xue-peng 

State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Key Laboratory of Veterinary Public Health of the Ministry of Agriculture,Lanzhou Veterinary Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046, China

Received:2011-04-16 Revised:1900-01-01 Online:2011-12-20 Published:2011-12-20

摘要/Abstract

摘要： 为了探讨天蚕类抗菌肽在动物早期抗感染过程中的作用机理,本研究以Shiva 1a基因的成熟肽为模板设计4条引物,利用重叠延伸PCR技术获得目的基因,并在C端添加6×His的标签。将此序列与真核表达载体pIRES₂-EGFP进行重组,构建pIRES₂-EGFP-Shiva 1a重组表达质粒,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,采用阳离子脂质体转染将重组质粒转染到CHO-K1细胞,荧光显微镜观察其表达情况。通过生物信息学软件对抗菌肽Shiva 1a的二级结构和三级结构进行预测分析。其结果为进一步研究Shiva 1a的抗菌活性和在动物抗病育种方面的应用奠定了基础。

关键词: 抗菌肽; Shiva 1a; 真核表达; 序列分析

Abstract: To explore the effect mechanism of cecropin-class lytic peptide at early stage of infection. The mat peptide of Shiva 1a was amplified by overlap extension PCR and the C-terminus contained 6×His-marker. The gene sequence were recombinant with eukaryotic expression vector pIRES₂-EGFP. After being identified by restriction enzyme digestion and sequencing, the recombinant plasmid pIRES₂-EGFP-Shiva 1a was transfected into CHO-K1 cells by liposomes. The expression of the the recombinant plasmid pIRES₂-EGFP-Shiva 1a was observed by fluorescence microscope. At the same time, the secondary structure and 3D structure were predicted by bioinformatics tools. The results lay the foundation in research of antimicrobial activities and applications of the antimicrobial peptide Shiva 1a in breeding for disease resistance of animals.

Key words: antimicrobial peptide; Shiva 1a; eukaryotic expression; sequence analysis

中图分类号:

宫晓炜;郑福英;蔺国珍;曹小安;王光华;周继章;才学鹏. 抗菌肽Shiva1a基因真核表达载体的构建及序列分析[J]. , 2011, 38(12): 96-99.

GONG Xiao-wei;ZHENG Fu-ying;LIN Guo-zhen;CAO Xiao-an;WANG Guang-hua;ZHOU Ji-zhang;CAI Xue-peng . Construction of Eukaryotic Expression Vector and Sequence Analysis of Antimicrobial Peptide Gene Shiva 1a[J]. , 2011, 38(12): 96-99.

[1]	窦俊峰, 汪最, 李丽, 卢琴, 金鑫鑫, 凌小淳, 罗青平, 翟新国. A、B、J亚群禽白血病病毒混合感染的鉴定及gp85基因序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2024, 51(1): 302-311.
[2]	潘鹏丞, 雷宗全, 李显, 胡湘云, 秦谦涛, 覃兆鲜, 关志惠, 陈宝剑, 谢炳坤. 陆川猪MYL2基因生物信息学分析、真核表达载体构建及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1796-1806.
[3]	布阿依夏木·库尔班, 王义鑫, 杨铖熹, 耿子健, 徐滢清, 罗刚. 天蚕素A和溶菌酶杂合肽在毕赤酵母中重组表达及其活性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(12): 5032-5042.
[4]	康丹菊, 彭秋云, 周嘉欣, 陈进军, 林红英, 周光现. 黄麻羽肉鸡β-防御素基因AvBD1和AvBD2克隆、生物信息学分析及组织表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4325-4337.
[5]	邢天琦, 许迪, 颜港, 王钰滨, 王梦影, 梁晶, 兰干球. 巴马小型猪ABCD4基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4338-4348.
[6]	冯亚楠, 杨娜, 毛若雨, 郝娅, 马炫炫, 滕达, 王建华. 高效液相色谱法检测鼠饲料中抗菌肽NZ2114[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4463-4472.
[7]	李楠, 孟锦昕, 王建聂, 何于雯, 杨绍昌, 吕顺燕, 王静林. 牛结节性皮肤病病毒检测及蠓、蚊携带病毒调查[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(10): 4179-4187.
[8]	黄璟昇, 朱树馨, 康伟超, 邓志杰, 杨云梅, 刘城志, 易丹丹, 何家康, 梁正敏. 抗菌肽BNBD5调节肺脏先天免疫抵御胸膜肺炎放线杆菌感染的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(10): 4261-4269.
[9]	邓丽, 李杰, 刘保国, 杭柏林. 牛血红蛋白β亚基片段衍生抗菌肽的分子设计及其抗菌活性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3589-3598.
[10]	白少成, 周娟, 靳荣帅, 王璠, 卢婷婷, 汤先伟, 赵博昊, 吴信生, 陈阳. 新西兰白兔CYP11A1基因的克隆、生物信息学分析及其对繁殖相关基因的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(7): 2484-2496.
[11]	邹剑伟, 邹菊红, 申玉建, 韦一, 张叁保, 连子童, 徐建建, 宋颖, 黄艳娜, 韦英明, 蒋钦杨, 郑自华. 努比亚山羊LMCD1基因生物信息学分析、真核表达载体的构建及表达[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2033-2042.
[12]	董媛, 于鸿绪, 陈国良, 鲍东博, 崔嘉芮, 刘磊, 王会岩. 牛妊娠相关蛋白19真核表达载体的构建及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1233-1243.
[13]	宋春, 王柏林, 李梅, 文明, 王开功, 陈常秀, 程振涛. 鸡滑液囊支原体贵州株的分离鉴定及VlhA基因序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1516-1523.
[14]	韦云芳, 李飞翔, 星云, 黄庆国, 李居东, 万九生, 陈方良. 昆明犬IGF2基因克隆、生物信息学分析及其时空表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 866-875.
[15]	何献铭, 任广彩, 叶俊贤, 兰虹, 刘郁夫, 熊挺, 杨泽坤, 徐婷, 陈瑞爱. 1株传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1005-1014.