O型口蹄疫病毒P1-2A基因重组杆状病毒的构建及其表达

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (10): 81-85.

O型口蹄疫病毒P1-2A基因重组杆状病毒的构建及其表达

廖德芳¹, 信爱国¹, 高华峰¹, 苗海生¹, 高林¹, 朱明旺², 李华春¹

1. 云南省畜牧兽医科学院,云南昆明 650224;2. 云南省保山疫苗厂,云南保山 678000

收稿日期:2011-03-11 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-10-20 发布日期:2011-10-20
通讯作者: 李华春

Construction and Expression of Recombinant Baculovirus with P1-2A Gene of Serotype O Foot-and-mouth Disease Virus

LIAO De-fang¹, XIN Ai-guo¹, GAO Hua-feng¹, MIAO Hai-sheng¹, GAO Lin¹, ZHU Ming-wang², LI Hua-chun¹

1. Yunnan Animal Science and Veterinary Institute,Kunming 650224, China;2. Yunnan Baoshan Vaccine Plant,Baoshan 678000, China

Received:2011-03-11 Revised:1900-01-01 Online:2011-10-20 Published:2011-10-20

摘要/Abstract

摘要： 设计合成特异引物,扩增O型口蹄疫病毒(O/FMDV)P1-2A基因,将其克隆至T载体上,通过Hind Ⅲ和Not Ⅰ双酶切P1-2A基因和真核转座载体pFastBac^TMDual,构建重组转座质粒pFastBac-P12A,再将pFastBac-P12A转化入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac,经重组筛选获得杆状病毒重组质粒Bacmid-P12A。将Bacmid-P12A质粒转染Sf9昆虫细胞,出现典型CPE。病变细胞经Dot blotting和SDS-PAGE检测和分析,结果表明,O/FMDV P1-2A蛋白在Sf9细胞中获得表达,为O型FMDV特异性蛋白。

关键词: 口蹄疫病毒; P1基因; 重组杆状病毒; 表达

Abstract: Based on the known nucleotide sequence of FMDV gene, P1-2A gene primer was designed and synthesized. P1-2A gene was amplified by RT-PCR. The gene was then cloned into pMD18-T plasmid. The recombinant plasmids were sequenced and cloned into transfer vector pFastBac^TMDual. The transfer plasmid pFastBac-P12A was constructed. pFastBac-P12A was further transferred into receptor DH10Bac bacteria containing a shuttle vector Bacmid. The recombinant plasmid Bacmid-P12A was obtained by selection, then was trans-infected into Sf9 insect cells. The recombinant baculovirus which expressing serotype O FMDV P1-2A gene was harvested. The Sf9 cells were trans-infected with recombinant baculovirus expressing serotype O FMDV P1-2A gene and showed typical CPE. The cells were harvested and tested by FMDV Dot blotting and SDS-PAGE analysis. Results indicated that the serotype O FMDV P1-2A gene expressed in Sf9 cells and the P1-2A protein antigen was specific to serotype O FMDV.

Key words: FMDV; P1-2A gene; recombinant baculovirus; expression 

中图分类号:

廖德芳;信爱国;高华峰;苗海生;高林;朱明旺;李华春. O型口蹄疫病毒P1-2A基因重组杆状病毒的构建及其表达[J]. , 2011, 38(10): 81-85.

LIAO De-fang;XIN Ai-guo;GAO Hua-feng;MIAO Hai-sheng;GAO Lin;ZHU Ming-wang;LI Hua-chun. Construction and Expression of Recombinant Baculovirus with P1-2A Gene of Serotype O Foot-and-mouth Disease Virus[J]. , 2011, 38(10): 81-85.

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