植物乳杆菌α-半乳糖苷酶基因（melA）的克隆与序列分析

›› 2011, Vol. 38 ›› Issue (1): 95-99.

植物乳杆菌α-半乳糖苷酶基因（melA）的克隆与序列分析

任大勇1,2,3，李昌2，秦艳青2,3，杜寿文1,2，胡博1,2，金宁一2

（1.吉林大学农学部畜牧兽医学院，吉林长春 130062； 2.军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春 130062；3.吉林农业大学食品科学与工程学院，吉林长春 130118)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-01-01 发布日期:2011-01-01
通讯作者: 金宁一

Cloning and Sequence Analysis of the α-galactosidase Gene （melA）from L. plantarum

REN Da-yong1,2,3，LI Chang2，QIN Yan-qing2,3，DU Shou-wen1,2，HU Bo1,2，JIN Ning-yi2

(1.College of Animal and Veterinary Medicine，Jilin University, Changchun 130062, China；2.Military Veterinary Institute, Academy of Military Medical Sciences, Changchun 130062, China；3.College of Food Science and Engineering, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-01-01 Published:2011-01-01
Contact: JIN Ning-yi

摘要/Abstract

摘要： 试验以L.plantarum1.557的基因组DNA为模板，通过PCR技术扩增α-半乳糖苷酶基因（melA）基因，PCR产物经纯化回收后克隆至pMD18-T载体中，转化E.coli DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒进行SacⅠ和Sph Ⅰ酶切及PCR扩增鉴定，并对melA基因片段进行序列测定。结果表明，测得的melA基因序列全长2240 bp，含有酶切位点、启动子、SD序列及编码738个氨基酸的开放阅读框，理论分子质量为84 ku；4种核苷酸中GC含量为47.45%、AT含量为52.55%；序列中有3个碱基发生了变化，均为无义突变，未导致其推导的氨基酸的改变；序列测定结果与GenBank中登录的序列进行比较，核苷酸和氨基酸序列的同源性除与AY873840相比分别为96.6%和92.2%外，其余均大于99%。试验成功克隆了melA基因，为进一步构建重组表达载体奠定了基础。

关键词: 植物乳杆菌; α-半乳糖苷酶; 分子克隆; 序列分析

Abstract: Using chromosome DNA of L. plantarum as template，melA gene was amplified by PCR and purified by purification kit in this study. The PCR product of melA gene was cloned into pMD18-T vector and transformed into DH5α competent cells. The recombinant plasmid containing melA gene was selected and the inserted melA gene was identified by cleaved with restriction endonuclease Sac Ⅰ and Sph Ⅰ, and following by PCR amplification and sequencing. The cloned complete melA gene sequence, at a length of 2240 bp, encoded 738 amino acids with a deduced molecular weight of 84 ku. The GC and AT contents were 47.45% and 52.55% respectively. Three nucleotides nonsense mutation were observed, resulting no change of deduced amino acids. The homologies of nucleotides and amino acids were more than 99% respectively (except for AY873840, 96.6% and 92.2%) compared with those in GenBank. The results showed that the whole melA gene was cloned successfully. This research proved a foundation for the construction of recombinant express vector of melA gene.

Key words: L. plantarum; α-galactosidase; cloning; sequence analysis

中图分类号:

任大勇;;李昌;秦艳青;;杜寿文;;胡博;;金宁一. 植物乳杆菌α-半乳糖苷酶基因（melA）的克隆与序列分析[J]. , 2011, 38(1): 95-99.

REN Da-yong;;LI Chang;QIN Yan-qing;;DU Shou-wen;;HU Bo;;JIN Ning-yi. Cloning and Sequence Analysis of the α-galactosidase Gene （melA）from L. plantarum[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2011, 38(1): 95-99.

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