抗蓖麻毒素单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (5): 65-69.

抗蓖麻毒素单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

纪秋野1，2，梁鸿雁1，刘文森2，高宏伟2

（1.黑龙江八一农垦大学，大庆 163319； 2.军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130062）

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-05-20 发布日期:2010-05-20
通讯作者: 高宏伟

Construction of a Single Chain Variable Fragment (ScFv) Antibody against Ricin and Expression in E.coli

JI Qiu-ye1，2， LIANG Hong-yan1， LIU Wen-sen2， GAO Hong-wei2

(1.Heilongjiang Bayi Agricultural University，Daqing 163319,China; 2.Research Institute of Veterinary，Academy of Military Medical Sciences，Changchun 130062, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-05-20 Published:2010-05-20
Contact: GAO Hong-wei

摘要/Abstract

摘要： 为构建和表达抗RT单链抗体(ScFv)蛋白，用RT-PCR方法从能分泌特异性抗RT单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因。用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起，构建抗RT-ScFv基因。将ScFv基因连接到pMAL-p2X表达载体，转化TB1表达菌。阳性克隆用IPTG诱导18 h，Western blotting鉴定重组蛋白。结果表明，试验成功扩增出了ScFv基因，长度约为750 bp。通过DNA序列测定和分析，构建出VL-(Gly4Ser)3-VH。其VH全长363 bp，可编码121个氨基酸，VL全长324 bp，可编码108个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明，抗RT-ScFv在TB1表达菌中获得高效表达，pMAL-p2X表达的ScFv加上同时融合表达的MBP标签分子质量约为75 ku。本试验成功构建了pMAL-RT-ScFv表达载体，并获得了高效表达。

关键词: 4D12; 单链抗体; 蛋白表达; 蓖麻毒素

Abstract: To construct and express a single chain variable(ScFv) fragment against ricin, VH and VL genes of anti-murine RT monoclonal antibody were cloned by RT-PCR from hybridoma cell secreting anti-RT McAb. ScFv gene was spliced by sequence overlap extending (SOE) PCR. ScFv gene was cloned into pMAL-p2X expression vector and transformed into TB1 E.coli. After positive clones were induced by IPTG for 18 hours，the identification of recombinant protein was detected by Western blotting. ScFv gene of VL-(Gly4Ser)3-VH was constructed successfully. The VH chain consisted of 363 bp and encoded 121 amino acids. The VL chain consisted of 324 bp and encoded 108 amino acids. SDS-PAGE and Western blotting analysis showed that the RT-ScFv gene was expressed in TB1 E.coli. The ScFv antibody expressed by pMAL-p2X fused with MBP tag protein and the relative molecular mass of fusion protein was about 75 ku. The expression vector of pMAL-RT-ScFv fusion protein was constructed successfully，and procured high performance expression.

Key words: 4D12; ScFv; protein expression; ricin

中图分类号:

Q786

纪秋野;;梁鸿雁;刘文森;高宏伟. 抗蓖麻毒素单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达[J]. , 2010, 37(5): 65-69.

JI Qiu-ye;;LIANG Hong-yan;LIU Wen-sen;GAO Hong-wei. Construction of a Single Chain Variable Fragment (ScFv) Antibody against Ricin and Expression in E.coli[J]. , 2010, 37(5): 65-69.

[1]	袁世豪, 张海琳, 鞠宁, 王新乐, 赵海渊, 邵怡岚, 李佳璇, 姜艳平, 崔文, 唐丽杰, 李一经, 王晓娜. 不同组成型启动子对乳酸菌表达系统外源基因表达影响的比较[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(11): 4370-4380.
[2]	张梦杨, 何健, 刘阳坤, 姚伦广. 非洲猪瘟病毒p37蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(1): 300-309.
[3]	侯伟. 噬菌体展示系统的构建及其在疾病防控领域应用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1688-1696.
[4]	吴双敏, 李龙, 侯仁, 陈玉霜, 彭大鹏. 兽药小分子与生物识别元件相互作用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 755-764.
[5]	黄惠兰, 李文俊, 谢梓民, 杨惠湖, 崔惠仪, 黄淑坚, 张雪莲. 鸭干扰素刺激基因的克隆、表达及其多克隆抗体的制备[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(11): 3713-3721.
[6]	候仁, 黄玲利, 陶燕飞, 谢长清, 刘振利, 彭大鹏. 单链抗体在小分子化学物质残留检测中的研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(1): 249-257.
[7]	孔子萌, 江波, 蔡云虹, 何后军, 李永清, 靳换. 鸡补体受体2基因克隆、蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(1): 201-208.
[8]	张孝忠, 刘一凡, 谷思颖, 余娜, 段彦祥, 李有文. 流行性乙型脑炎病毒NS1基因克隆及其蛋白表达纯化[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(8): 2320-2326.
[9]	吴靖, 许健, 黄秀芬, 沈俊俊, 何后军, 李永清. 抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(8): 2475-2482.
[10]	张少铎, 来怡君, 姜辉, 程欣然, 叶玉婷, 何溪雨, 徐乐, 宋佰芬, 于立权, 崔玉东, 马金柱. 含有分子内佐剂的CIC蛋白表达及免疫活性初步研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(12): 3612-3617.
[11]	李金娜, 宋书婷, 陈宏伟, 刘涛, 赵爱云, 李有文. 山羊痘病毒毒力因子KLP2的表达及多克隆抗体的制备[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(10): 2851-2857.
[12]	马金柱;宋佰芬;王北艳;曹宁;于立权;崔玉东;朱战波. 金黄色葡萄球菌IsdD基因的克隆与表达[J]. , 2011, 38(12): 103-105.
[13]	梁艺瑜;冯少珍;史伟伟;刘红波;王小芬;李育豪;廖明;曹伟胜. J亚群禽白血病病毒gp85单因子血清的制备[J]. , 2011, 38(10): 76-81.
[14]	孟辉;温凯;沈建忠;王战辉;张素霞. 抗庆大霉素噬菌体抗体库的构建和筛选[J]. , 2011, 38(1): 76-80.