工程菌DH5a感受态细胞的制备及质粒pGEM的转化研究

›› 2007, Vol. 34 ›› Issue (5): 88-90.

工程菌DH5a感受态细胞的制备及质粒pGEM的转化研究

杜祯，马海利，陈瑞芳

山西农业大学，太谷 030801

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-05-20 发布日期:2007-05-20

Preparation of Engineering E Coli DH_5a Sensitive Cell and Study on the Plasmid pGEM Transformation

DU Zhen, MA Haili,CHEN Ruifang

Shanxi Agriculture University, Taigu 030801,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-05-20 Published:2007-05-20

摘要/Abstract

摘要： 绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是源于海洋生物多管水母(aequoia victoria)的一种发光蛋白，能够自身催化形成生色团并在蓝光激发下发出绿色荧光，能在活细胞内稳定表达，本试验首先从含有GFP的大肠杆菌中提取质粒，并利用胶回收试剂盒纯化质粒，采用氯化钙法将工程菌DH_5a制成感受态细胞，然后将纯化后的质粒转入已制备好的感受态细胞中，使得工程菌DH_5a转化成具有抗氨苄青霉素的大肠杆菌，并表达绿色荧光蛋白，接种于加氨苄青霉素的LB培养基上，筛选阳性克隆。

关键词: GFP; 工程菌DH_5a; 质粒pGEM

Abstract: GFP to the optical bleaching, the oxidant, the reducing agent, the acid, the alkali and all that many chemical reagent has the greatly strengthened stability. First, from includes GFP in the backwoods coli to withdraw the material particle, and causes its purification using the rubber recycling reagent box. At the same time, makes using the calcium chloride law project fungus DH_5a the feeling condition cell. Then will purify after the material particle to change over to already in the feeling condition cell which the system will arrange, will cause project fungus DH_5ato transform has the anti-ammonia animal pen penicillin the backwoods coli, and the vaccination in on the ammonification animal pen penicillin culture medium, willcause its growth.

Key words: GFP; engineering E coli DH_5a; plasmid pGEM

中图分类号:

S852.61+2

杜祯;马海利;陈瑞芳. 工程菌DH5a感受态细胞的制备及质粒pGEM的转化研究[J]. , 2007, 34(5): 88-90.

DU Zhen;MA Haili;CHEN Ruifang. Preparation of Engineering E Coli DH_5a Sensitive Cell and Study on the Plasmid pGEM Transformation[J]. , 2007, 34(5): 88-90.

[1]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.
[2]	殷娟斌, 周亚花, 殷相平, 张志东. 携带绿色荧光蛋白基因重组猫泛白细胞减少症病毒的拯救[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(6): 1853-1860.
[3]	武琳琳, 张衡, 李世杰, 马兴红. 条件性子宫细胞剔除的研究[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(4): 1140-1147.
[4]	黄彩云, 赵志荀, 朱学亮, 王战红, 吴香草, 吴国华, 张志东, 张强. 表达绿色荧光蛋白的MVA重组毒株的构建及筛选[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(7): 2079-2087.
[5]	谢婉, 何剑雄, 夏攀洁, 吴延军, 焦迪, 陈宝剑, 关志惠, 兰干球, 郭亚芬, 谢炳坤. 陆川猪GPR1基因真核表达载体构建及组织表达谱分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(8): 2049-2056.
[6]	刘翠, 殷相平. 携带GFP基因的重组狂犬病病毒的拯救及其生物学特性研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2018, 45(7): 1965-1971.
[7]	赵佳福, 段志强, 杨远青, 嵇辛勤, 王圆圆, 孙成娟. 从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(7): 1954-1960.
[8]	胡梦薇, 刘朋涛, 严国, 高剑峰. 两种布鲁氏菌弱毒株侵染小鼠巨噬细胞过程的荧光表征及分析[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(8): 1944-1950.
[9]	闫涛, 王瑞瑶, 朱和平, 苏晓田, 王亚娟, 李浩天, 周欢敏. 可定点整合的无筛选标记LacS基因表达载体的构建与鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》---唯一指定的官方网站, 2015, 42(6): 1348-1354.
[10]	庞峰, 史巧芸, 朱华培, 徐开莲, 赵天靖, 李亚颖, 彭冬梅, 李国华, 周海龙, 王凤阳. 牛乳状瘤病毒13型pEGFP-E5-N1真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达[J]. , 2015, 42(5): 1088-1092.
[11]	高磊, 赵海焦, 吴金栋, 田娅慧, 张中文, 吴国娟. 泛素化调节因子2真核表达质粒的构建及其在原代肾小管上皮细胞的表达[J]. , 2013, 40(6): 37-40.
[12]	刘畅, 冯冲, 宋志强, 李西睿, 王宁, 储明星, 潘登科. 利用TALENs技术建立基因定点修饰的猪Oct-4-EGFP细胞系[J]. , 2013, 40(11): 1-6.
[13]	匡文华;张晓茹;成鹰;杜丽;雷明;焦寒伟;张冬琳;郝永昌;祁超;王凤阳. 水牛髓样分化因子88融合蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达[J]. , 2012, 39(4): 50-54.
[14]	沈文, 孙延鸣, 崔茹鹏, 鲁海富, 肖林晋, 石国庆. 新疆细毛羊pEGFP-C2-KAP6.1真核表达质粒的构建与鉴定[J]. , 2012, 39(12): 17-20.
[15]	张利涛;刘慧琳;曹以诚. 肝脏特异性表达载体的构建及Western blotting检测[J]. , 2011, 38(1): 100-104.