从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.07.008

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (7): 1954-1960.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.07.008

从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究

赵佳福^1,2, 段志强^1,2, 杨远青³, 嵇辛勤², 王圆圆^1,2, 孙成娟^1,2

1. 贵州大学, 高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室, 贵阳 550025;
2. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;
3. 贵州省毕节市畜禽遗传资源管理站, 毕节 551700

收稿日期:2017-02-23 出版日期:2017-07-20 发布日期:2017-07-22
通讯作者: 赵佳福 E-mail:zhaojiafu1984@126.com
作者简介:赵佳福(1984-),男,陕西渭南人,博士生,实验师,研究方向:分子细胞遗传学
基金资助:
省校联合基金（黔科合LH字[2014]7668）；贵州省科技重大专项（黔科合重大专项字[2013]6008号）；贵州大学青年基金（贵大自青基合字[2012]010号）

Cloning and Subcellular Localization of ApoA1 Gene in Congjiang Xiang Pig

ZHAO Jia-fu^1,2, DUAN Zhi-qiang^1,2, YANG Yuan-qing³, JI Xin-qin², WANG Yuan-yuan^1,2, SUN Cheng-juan^1,2

1. Key Laboratory of Animal Genetics, Breeding and Reproduction in the Plateau Mountainous Region, Ministry of Education, Guizhou University, Guiyang 550025, China;
2. College of Animal Science, Guizhou University, Guiyang 550025, China;
3. Animal Genetic Resources Management of Bijie City of Guizhou Province, Bijie 551700, China

Received:2017-02-23 Online:2017-07-20 Published:2017-07-22

摘要/Abstract

摘要：

试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1（apolipoprotein A1，ApoA1）基因，研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA，采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒，并经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确后，转染HEK-293T细胞，36 h后观察荧光，分析ApoA1蛋白在真核细胞中的亚细胞定位情况。结果表明，从江香猪ApoA1基因与GenBank上公布的野猪序列相比，有6处发生了碱基突变，其中5处为有义突变，分别导致180位氨基酸由丙氨酸变为谷氨酸、185位氨基酸由组氨酸变为谷氨酰胺、186位氨基酸由缬氨酸变为亮氨酰胺、209位氨基酸由天冬氨酸变为甘氨酸；PSORT Ⅱ Prediction和荧光共定位试验结果均表明，ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质，约占总表达量的77.8%。本试验成功克隆了从江香猪ApoA1基因CDS区，且ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质中，为进一步构建ApoA1基因转基因动物模型、开展ApoA1基因与人类因肥胖引起的相关疾病关系的研究奠定基础。

关键词: 丛江香猪; ApoA1基因; pEGFP-C1载体; HEK-293T细胞; 生物信息学分析; 亚细胞定位

Abstract:

This experiment was aimed to clone apolipoprotein A1(ApoA1) gene of Congjiang Xiang pig, and study the subcelluar localiztion of ApoA1 gene in eukaryocyte. The recombination plasmid pEGFP-C1-ApoA1 was constructed with RT-PCR and other methods, and detected by colony PCR,double digestion and sequencing, after successful construction of the recombination plasmid pEGFP-C1-ApoA1,the subcellular localization of ApoA1 protein were analyzed by fluorescence co-localization technique in the 36 h-transfected HEK-293T cells. Compared with ApoA1 gene of Sus scrofa submission in GenBank, the results showed that six base mutations were found in ApoA1 gene of Congjiang Xiang pig, five of above mentioned mutations were sense mutations, causing alanine to glutamic acid, histidine to glutamine, valine to leucine and aspartic acid to glycine in 180,185,186 and 209 amino acid residues, respectively. Using PSOR Ⅱ Prediction and fluorescence co-localization, it was found that the expression of ApoA1 protein was observed mainly in the extracellular matrix (77.8%). In conclusion, ApoA1 gene of Congjiang Xiang pig was cloned successfully, and the expression of ApoA1 protein was mainly concentrated in the extracellular matrix. These results would provide a knowledge for further constructing the ApoA1 gene transgenic animal models, and contribute to understanding the relation between ApoA1 gene and the human obesity-induced diseases.

Key words: Congjiang Xiang pig; ApoA1 gene; pEGFP-C1 vector; HEK-293T cell; bioinformatics analysis; subcellular localization

中图分类号:

Q785

赵佳福, 段志强, 杨远青, 嵇辛勤, 王圆圆, 孙成娟. 从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(7): 1954-1960.

ZHAO Jia-fu, DUAN Zhi-qiang, YANG Yuan-qing, JI Xin-qin, WANG Yuan-yuan, SUN Cheng-juan. Cloning and Subcellular Localization of ApoA1 Gene in Congjiang Xiang Pig[J]. , 2017, 44(7): 1954-1960.

参考文献

[1] 刘益洲,刘亚密,马小峰,等.干预载脂蛋白A1表达的研究进展[J].中国动脉硬化杂志,2017,25(2):203-209.
[2] Scriver C R, Beaudet A L, Sly W S,et al.The Metabolic Basis of Inherited Disease[M]. 6th ed. NewYork:McGraw-Hill, 1989.
[3] 夏安琪.江西不同地方品种鸡apoA-Ⅰ、apoB基因多态性与其脂肪代谢的关联性分析[D]. 南昌:江西农业大学,2014.
[4] 吴燕华.代谢综合征环境因素与APOA1-APOC3-APOA4-APOA5基因簇基因多态性的交互作用研究[D].长春:吉林大学,2015.
[5] 陈晓春.高密度脂蛋白对动脉粥样硬化抵抗作用及其机制[D].上海:复旦大学,2010.
[6] 邹阳春,胡大一,杨新春,等.国人载脂蛋白A1基因多态性与血脂水平及冠心病的关系[J].中国动脉硬化杂志,2003,11(4):345-348.
[7] Segrest J P, Li L, Anantharamaiah G M, et al. Structure and function of apolipoprotein A-Ⅰ and high-density lipoprotein[J]. Clinical Genetics, 2002,61(4):314-316.
[8] Chen E S, Mazzotti D R, Furuya T K, et al. Apolipoprotein A1 gene polymorphisms as risk factors for hypertension and obesity[J]. Clinical and Experimental Medicine, 2009, 9(4):319-325.
[9] Zoppini G, Negri C, Stoico V, et al. Triglyceride-high-density lipoprotein cholesterol is associated with microvascular complications in type 2 diabetes mellitus[J]. Metabolism, 2012,61:22-29.
[10] 柳晓义,曹伟红,王宇,等. ApoA1基因多态性与乳腺癌发病相关性的研究[J].中华肿瘤防治杂志,2011,18(19):1506-1509.
[11] 方蓉,马百坤,黄宇烽. 载脂蛋白A1基因克隆及序列分析[J].医学研究生学报,2003,8(16):574-576.
[12] 阚延泽,江翱,孙文秀. 黄鳝载脂蛋白A1基因结构及表达谱分析[J].水产科学,2016, 6(16):697-681.
[13] 麻延峰,方倩倩,王宏艳,等.鹅ApoA1,CD36和DGAT2基因的cDNA克隆与序列分析[J].浙江农业学报,2015, 27(10):1710-1719.
[14] 万洁. 兔APO-A1基因多态性及其与部分生产性状的关联研究[D].雅安:四川农业大学,2008.
[15] 熊婷. 鸡ApoA-1和ApoA-Ⅴ基因多态性与胆固醇含量及繁殖性状的关联研究[D].雅安:四川农业大学,2012.
[16] 李步高,郭晓红,曹果清,等. 猪ApoA5基因cDNA的克隆、序列分析及组织表达研究[J].畜牧兽医学报,2011, 42(7):913-920.
[17] 王立,徐颜美,程竹君,等. 胆固醇代谢紊乱的遗传学研究进展[J].遗传,2014,36(9):857-863.
[18] Hsu L C, Lee T H. Apolipoprotein A1 rs5070 A/G polymorphism with stroke subtypes in Taiwan[J].J Chin Assoc,2017, Equb ahead of print.
[19] Dodani S, Henkhaus R, Dong L, et al. Apolipoprotein A1 gene polymorphisms predict cardio-metabolic risk in South Asian immigrants[J].Dis Markers, 2012,32(1):9-19.
[20] Ankit B S, Mathur G, Agrawal R P, et al. Stronger relationship of serum apolipoprtein A-1 and B with diabetic retinopathy than traditional lipids[J]. Indian J Endocrinol Metab, 2017, 21(1):102-105.
[21] Vinodhini V M, Gnaneswaran S, Ebenezer W W, et al. A study on the pattern of lipid profile and apolipoproteins in patients with diabetic retinopathy[J]. Int J Pharm Clin Res, 2013, 5:1-3.
[22] 张晶.猪脂肪沉积关键基因的初步筛选[D].郑州:河南农业大学,2012.
[23] 岳媛,陈洪艳,王嘉玮,等.载脂蛋白CⅢ刺激猪主动脉血管内皮细胞差异表达基因的研究[J].中国畜牧兽医,2016,43(3):585-591.

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Cloning and Subcellular Localization of ApoA1 Gene in Congjiang Xiang Pig

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[1]	刘佳隆, 张译文, 张悦然, 孙奇娟, 陈建, 何雷, 贾艳艳, 丁轲, 余祖华. 鸡ELAVL1基因克隆、原核表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1807-1817.
[2]	卓娜, 朱忠武, 李静, 胡世享, 王建昌, 林华, 陈朝林, 韩佃刚, 艾军, 陈培富. 猪源戊型肝炎病毒ORF2蛋白生物信息学分析及真核表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(5): 1959-1970.
[3]	范冰峰, 李文, 刘理想, 赵向远, 邵静, 林乐丰, 孙慧敏, 张旭林, 许保增. 水貂AANAT基因克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1307-1318.
[4]	贾新月, 马静, 张艳艳, 马勋, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 847-858.
[5]	李华玮, 郭科威, 王旭英, 张小雨, 路紫微, 李新锋, 马辉, 侯文静. 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7真核表达及亚细胞定位[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1160-1168.
[6]	韦义荣, 郑自华, 张叁保, 宋颖, 蒋海玉, 孙雯玥, 程鹏飞, 刘雨帆, 邹剑伟, 黄艳娜, 潘艳, 蒋钦杨. 努比亚山羊UCP1基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 440-450.
[7]	甘露, 郑会珍, 诺明达来, 刘燕, 金敏, 何文文, 温丽翠, 李永畅, 巴音查汗·盖力克. 伊氏锥虫伊犁株扩繁及其PFR基因克隆表达和生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 469-478.
[8]	唐井玉, 杜汉宇, 孟春春, 刘光清. 山羊干扰素刺激基因15克隆、生物信息学分析及亚细胞定位[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 2843-2854.
[9]	付永智, 马晓君, 王茂晗, 李哲, 陈芝媛, 权伟, 赵涵, 苏咏梅, 吴建华, 朱文进. 阳原驴MSTN基因生物信息学分析及组织表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(8): 2910-2919.
[10]	邹剑伟, 邹菊红, 申玉建, 韦一, 张叁保, 连子童, 徐建建, 宋颖, 黄艳娜, 韦英明, 蒋钦杨, 郑自华. 努比亚山羊LMCD1基因生物信息学分析、真核表达载体的构建及表达[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2033-2042.
[11]	张丽萌, 刘爱菊, 李闰婷, 李玉华, 李林, 聂晓宁, 王林青, 陈龙欣. 绵羊CREBRF基因克隆、生物信息学及组织表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1599-1609.
[12]	王宝宝, 金行, 鲜钰涵, 冯宏盛, 高凤山. 猪肾上皮细胞SLA-1基因的克隆及分子结构特征分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(5): 1671-1678.
[13]	雷行, 李天峰, 李嘉昊, 满欣, 白素英. 麝鼠香腺Elovl1基因生物信息学分析及表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1201-1212.
[14]	申祥, 陈伶慧, 姚竞杰, 王三虎, 白跃宇, 张晓建. 牛源CCR7基因克隆、生物信息学及表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1244-1252.
[15]	邱润辉, 关飞虎, 陶婷婷, 李佳, 赵天艺, 邓兴梅, 史超, 孙志华, 张辉. 布鲁氏菌分泌蛋白BPE005的亚细胞定位及与宿主细胞互作蛋白的筛选[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(4): 1438-1448.