雌二醇单克隆抗体制备及间接竞争ELISA检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.10.038

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (10): 3100-3105.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.10.038

雌二醇单克隆抗体制备及间接竞争ELISA检测方法的建立

白宇^1,2, 胡景炎², 许永鹏², 何杰², 金俊杰^1,2, 李培德^1,2, 刘素贞^1,2

1. 温州市农业科学研究院动物科学研究所, 温州 325006;
2. 温州科技职业学院动物科学学院, 温州 325006

收稿日期:2017-04-12 出版日期:2017-10-20 发布日期:2017-10-20
通讯作者: 刘素贞 E-mail:9830477@qq.com
作者简介:白宇(1979-),男,吉林白城人,博士,研究方向:激素类兽药残留检测,E-mail:baiyu106@163.com
基金资助:
浙江省公益性技术研究农业项目（2014C32046）；温州市公益性社会发展科技项目（S20150026）

Preparation of Monoclonal Antibody and Establishment of Indirect Competitive ELISA of Estradiol

BAI Yu^1,2, HU Jing-yan², XU Yong-peng², HE Jie², JIN Jun-jie^1,2, LI Pei-de^1,2, LIU Su-zhen^1,2

1. Institute of Animal Science, Wenzhou Academy of Agricultural Sciences, Wenzhou 325006, China;
2. College of Animal Science, Wenzhou Vocational College of Science and Technology, Wenzhou 325006, China

Received:2017-04-12 Online:2017-10-20 Published:2017-10-20

摘要/Abstract

摘要：

为建立敏感、特异、快速的雌二醇（estradiol，E₂）残留免疫检测方法，本研究利用雌二醇人工抗原（E₂-BSA）免疫BALB/c小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备特异性雌二醇单克隆抗体，利用高效价、高特异性单克隆抗体建立间接竞争ELISA（icELISA）方法。结果显示，试验成功筛选获得一株稳定分泌抗雌二醇抗体的杂交瘤细胞株（3H3），抗体效价可达1∶320 000，利用3H3腹水抗体优化间接竞争icELISA反应条件，检测抗体的敏感度，IC₅₀为1.636 ng/mL，IC₂₀~IC₈₀线性范围为0.202~13.281 ng/mL。雌二醇腹水抗体与雌三醇、乙炔雌二醇的交叉反应率分别达0.31%和0.25%，而与雌酮、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、炔雌醚、己烯雌酚、壬基酚的交叉反应率均<0.1%。结果表明，利用本研究制备的单克隆抗体建立雌二醇间接竞争ELISA检测方法，可满足食品中雌二醇残留高灵敏度的检测要求。

关键词: 雌二醇; 单克隆抗体; 间接竞争ELISA

Abstract:

In order to establish a sensitive,specific and rapid method for the detection of estradiol (E₂) residues, an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) based on monoclonal antibody (MAb) for E₂ was developed. BALB/c mice were immunized by E₂-BSA and cell fusion technology was employed to screen hybridoma cell lines. One hybridoma cell line (3H3) was isolated, which produced monoclonal antibody that could binding E₂. Under the optimized conditions, the icELISA based on 3H3 for E₂ showed a half maximum inhibition concentration (IC₅₀) values of 1.636 ng/mL and detection ranges of 0.202 to 13.281 ng/mL with cross-reactivities for estriol and ethinyloestradiol of 0.31% and 0.25%, respectively, and negligible cross-reactivities with other E₂ analogs including estrone, estradiol valerate, estradiol benzoate, quinestrol, diethylstilbestrol and nonylphenol. The results demonstrated that the developed method could meet the requirements of high sensitivity detection of E₂ residue in food samples.

Key words: estradiol; monoclonal antibody; indirect competitive ELISA

中图分类号:

S859.84

白宇, 胡景炎, 许永鹏, 何杰, 金俊杰, 李培德, 刘素贞. 雌二醇单克隆抗体制备及间接竞争ELISA检测方法的建立[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(10): 3100-3105.

BAI Yu, HU Jing-yan, XU Yong-peng, HE Jie, JIN Jun-jie, LI Pei-de, LIU Su-zhen. Preparation of Monoclonal Antibody and Establishment of Indirect Competitive ELISA of Estradiol[J]. , 2017, 44(10): 3100-3105.

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Preparation of Monoclonal Antibody and Establishment of Indirect Competitive ELISA of Estradiol

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