鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.02.035

《中国畜牧兽医》 ›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (2): 554-560.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.02.035

鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定

傅秋玲^1,2,3, 刘伟¹, 黄瑜^1,2,3, 傅光华^1,2,3, 万春和^1,2,3, 程龙飞^1,2,3, 陈红梅^1,2,3, 施少华^1,2,3, 刘荣昌^1,2,3, 陈珍^1,2,3, 陈翠腾^1,2,3, 林建生^1,2,3

1. 福建省农业科学院畜牧兽医研究所, 福州 350013;
2. 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心, 福州 350013;
3. 福建省禽病防治重点实验室, 福州 350013

收稿日期:2016-07-28 出版日期:2017-02-20 发布日期:2017-02-25
通讯作者: 黄瑜 E-mail:huangyu_815@163.com
作者简介:傅秋玲(1985-), 女, 江西吉安人, 硕士, 研究方向:水禽疫病免疫学, E-mail:qiulingfu0822@163.com
基金资助:
国家自然科学基金（31472222）；现代农业产业技术体系建设专项（CARS-43）；福建省公益类科研院所专项（2014R1023-3、2015R1023-3和2016R1102）；福建省农业科学院畜牧兽医研究所基金（MYQJ2015-6）；福建省优良蛋鸭品种与设施化养殖创新产业化工程项目（2014-2016）

Development and Identification of Monoclonal Antibodies against VP1 Protein of DHAV-1a

FU Qiu-ling^1,2,3, LIU Wei¹, HUANG Yu^1,2,3, FU Guang-hua^1,2,3, WAN Chun-he^1,2,3, CHENG Long-fei^1,2,3, CHEN Hong-mei^1,2,3, SHI Shao-hua^1,2,3, LIU Rong-chang^1,2,3, CHEN Zhen^1,2,3, CHEN Cui-teng^1,2,3, LIN Jian-sheng^1,2,3

1. Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350013, China;
2. Fujian Animal Diseases Control Technology Development Center, Fuzhou 350013, China;
3. Fujian Provincial Key Laboratory for Avian Diseases Control and Prevention, Fuzhou 350013, China

Received:2016-07-28 Online:2017-02-20 Published:2017-02-25

摘要/Abstract

摘要：

为制备抗鸭1型甲肝病毒亚型（DHAV-1a）结构蛋白VP1的单克隆抗体（MAbs），本研究以pGEX-VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠，同时以纯化浓缩的全病毒作为包被抗原，建立了筛选抗VP1蛋白阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法，经融合、筛选制备杂交瘤细胞及鉴定MAbs的稳定性、特异性、腹水效价和中和活性等生物学活性，获得了2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞（1A2和5G3）。MAbs腹水ELISA效价分别为1：3.2×10⁴和1：2.0×10⁶。亚类鉴定均为IgG1/κ型。Western blotting结果显示，2株MAbs均能与DHAV-1a VP1蛋白和DHAV-1a全病毒发生特异性反应。特异性试验结果显示2株MAbs能与鸭1型甲肝病毒（DHAV-1）和DHAV-1a发生交叉反应。中和试验结果显示5G3株具有中和活性。结果表明2株MAbs的ELISA效价高、特异性强、稳定性好，均能与DHAV-1和DHAV-1a全病毒发生特异性反应，其中一株具有中和活性。

关键词: 鸭1型甲肝病毒亚型; 单克隆抗体; 生物学特性

Abstract:

To prepare the monoclonal antibodies (MAbs) against DHAV-1a, hybridomas were produced by fusing SP2/0 cells with spleen cells from mouse immunized with DHAV-1a pGEX-VP1 recombinant protein. Two hybridomas stablely secreting MAbs against VP1 protein were identified by indirect ELISA detection with DHAV-1a as coating antigen. The ascetic fluids of MAbs were 1:3.2×10⁴ and 1:2.0×10⁶, respectively. The MAbs were IgG1 with κ chain. Western blotting analysis showed that the MAbs could recognize the recombinant VP1 protein and DHAV-1a. The neutralization tests showed that one MAb (5G3) had better neutralization activity. Therefore, the results showed that the ELISA titers and specialities of two MAbs were very good, with excellent stability. In addition, they all had cross interaction with DHAV-1 and DHAV-1a, one of which had good neutralization activity.

Key words: DHAV-1a; monoclonal antibody; biological characteristics

中图分类号:

S852.65

傅秋玲, 刘伟, 黄瑜, 傅光华, 万春和, 程龙飞, 陈红梅, 施少华, 刘荣昌, 陈珍, 陈翠腾, 林建生. 鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定[J]. 《中国畜牧兽医》, 2017, 44(2): 554-560.

FU Qiu-ling, LIU Wei, HUANG Yu, FU Guang-hua, WAN Chun-he, CHENG Long-fei, CHEN Hong-mei, SHI Shao-hua, LIU Rong-chang, CHEN Zhen, CHEN Cui-teng, LIN Jian-sheng. Development and Identification of Monoclonal Antibodies against VP1 Protein of DHAV-1a[J]. , 2017, 44(2): 554-560.

参考文献

[1] Saif Y M著. 苏敬良, 高福, 索勋译.禽病学[M]. 第12版. 北京: 中国农业出版社, 2005.
[2] Wildy P. Classification and Nomenclature of Viruses——First Report of the International Committee on Nomenclature of Viruses[M]. Karger:1971.
[3] Levine P P, Fabricant J. A hitherto-underscribed virus disease of duck in North America[J]. Cormell Vet,1950,40(1):71-86.
[4] Macpherson L W. Duck virus hepatitis in Canada[J]. Canadian J of Comp Med,1957,21(2):26-31.
[5] Guerin J L, Albaric O, Noutary V, et al. A duck hepatitis virus type Ⅰ is agent of pancreatitis and encephalitis in Muscovy duckling[A].Proceedings of the 147th American Veterinary Medicine Association/50th American Association of Avian Pathologists Conference[C]. Washington DC: 2007.
[6] 傅光华,陈红梅,黄瑜,等. 雏番鸭胰腺型鸭1型甲肝病毒分离鉴定及VP1基因分析[J]. 福建农业学报, 2012, 27(9): 43-45.
[7] 傅光华,黄瑜,傅秋玲,等.致胰腺泛黄鸭1型甲肝病毒全基因组分子特征[J].微生物学报,2014,54(9):1082-1089.
[8] 陈珍,傅秋玲,陈红梅,等.胰腺型、经典型1型甲肝病毒对雏鸭的致病性差异[J].福建农业学报,2013,28(10):939-942.
[9] 傅秋玲,陈珍,黄瑜,等.鸭1型甲肝病毒亚型的鉴定[J].中国兽医杂志,2015,51(7):36-38.
[10] Kaleta E F. Duck viral hepatitis type Ⅰ vaccination: Monitoring of the immune response with a microneutralization test in Pekin duck embryo kidney cell culture[J]. Avian Pathol, 1988, 17: 325-332.
[11] Ding C, Zhang D. Molecular analysis of duck hepatitis virus 1[J]. Virology,2007,361(1):9-17.
[12] Liu G,Wang F, Ni Z, et al. Genetic diversity of the VP1 gene of duck hepatitis virus type 1 (DHV-1) isolates from Southeast China is isolate attenuation[J].Virus Research,2008,137(1):137-141.
[13] 施少华, 苏敬良, 黄瑜, 等. 鸭肝炎病毒新血清型基因组序列分析[J]. 微生物学报, 2009, 49(3):309-315.
[14] 傅秋玲,傅光华,陈红梅,等.胰腺炎型鸭1型甲肝病毒结构蛋白VP1基因的克隆和表达[J]. 福建农业学报,2014,29(5):409-412.
[15] 刘伟,傅秋玲,黄瑜, 等.检测鸭1型甲肝病毒抗体间接ELISA方法的建立[J]. 福建农业学报,2014,51(6):10-13.
[16] 徐志凯.实用单克隆抗体技术[M].西安: 陕西科学技术出版社,1992.
[17] 周珍辉,陈万荣,周育森,等.鸭肝炎病毒现场分离株单克隆抗体的研制[J].湖南农业大学学报(自然科学版),2011,37(1):78-81.
[18] 杨萍萍,宋敏训,艾武,等.鸭肝炎病毒单克隆抗体的研制[J].中国预防兽医学报,2006,28(2):212-216.
[19] 李晓军,张婷婷,孟凡依,等.抗Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定[J].中国预防兽医学报,2011,33(5):487-489.

鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白单克隆抗体的研制及鉴定

Development and Identification of Monoclonal Antibodies against VP1 Protein of DHAV-1a

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	王乐平, 潘艳, 谭奕舟, 李磊, 韩凯欧, 曹雅洁, 李军, 周雨晴, 廖玉英, 马东鑫, 龚俞, 彭昊, 王晓晔. 1株大肠杆菌噬菌体vB_EcoP_GN07的分离鉴定及全基因组分析[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(4): 1522-1531.
[2]	程龙飞, 廖维连, 陈红梅, 江南松, 傅秋玲, 万春和, 刘荣昌, 施少华, 黄瑜, 傅光华. 宽谱鸭疫里默氏菌噬菌体筛选及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1169-1176.
[3]	侯浩宇, 郑南南, 吴宏举, 陈寅龙, 李潮, 张昂克, 姬鹏超, 万博, 杜永坤, 张改平. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备和鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1241-1249.
[4]	刘彬, 黎梦, 习欠云, 孙加节, 罗君谊, 张永亮, 陈婷. 黑水虻的生物学特性及在家禽生产中的应用研究进展[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 586-597.
[5]	尹杨燕, 潘艳, 李小宁, 李军, 廖玉英, 李常挺, 韦天超, 彭昊. 1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(2): 666-673.
[6]	高也凡, 宋哈楠, 王育南, 吴月, 牛锐利, 宗宪春, 关伟军. 北京油鸡角膜缘干细胞分离培养及分化潜能研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(9): 3372-3381.
[7]	周雨晴, 马东鑫, 吴洁, 王晓晔. 宽谱大肠杆菌O157∶H7 CVCC4050噬菌体vB_EcoM_GXBP08的分离鉴定及特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(7): 2735-2745.
[8]	王乐铭, 王瑜瑞, 曾子轩, 饶国顺, 吴正姣, 靳纬坤, 王冬英. 抗大片形吸虫Cat L1单克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 677-686.
[9]	李金敏, 高绪娜, 桑瑞新, 宫本芝, 徐海燕, 谷巍, 郝木强, 兰江华, 王红. 1株禽大肠杆菌噬菌体的分离及杀菌效果评估[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 783-190.
[10]	李林林, 董嘉文, 张俊勤, 黄允真, 孙敏华. 鸭疫里默氏杆菌RIA_0940基因缺失株的构建及主要生物学特性测定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(12): 4564-4572.
[11]	李大鹏, 曹春华, 付鹏程, 张景艳, 张康, 王磊, 张凯, 刘琴, 包永占, 李建喜. 1株牦牛瘤胃源无色杆菌的鉴定及生物学特性评价[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(12): 4909-4919.
[12]	赵少若, 黄甜, 郝丽影, 吴洪超, 汪志艳, 崔宁宁, 王亚玲, 邓均华, 田克恭. 犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(11): 4429-4437.
[13]	郑会珍, 普浩, 缪荣浩, 甘露, 葛晓敏, 巴音查汗, 李永畅, 郭庆勇. 牛环形泰勒虫enolase基因的原核表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(10): 3972-3981.
[14]	莫红芳, 揭凯, 陈鑫, 文威, 刘文强, 陈焕春, 钱平, 李祥敏. 猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 307-317.
[15]	胡换仪, 汪建中, 刘昌锦, 林敏, 刘小兰, 魏黄思梧, 邓舜洲. 绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(1): 328-337.