猪传染性胃肠炎病毒截短S基因原核表达及免疫原性初步检测

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.10.005

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (10): 2541-2546.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.10.005

猪传染性胃肠炎病毒截短S基因原核表达及免疫原性初步检测

郑仲华¹, 杨佩¹, 赵明¹, 丘峰¹, 吴祖庆¹, 张仕云¹, 柳俏凡¹, 何洪洲¹, 洪纯丹¹, 魏楚丹¹, 赵爽¹, 李盼畔¹, 陈金顶²

1. 南沙出入境检验检疫局, 广州 511457;
2. 华南农业大学兽医学院, 广州 510642

收稿日期:2016-03-31 出版日期:2016-10-20 发布日期:2016-10-28
通讯作者: 陈金顶 E-mail:jdchen@scau.edu.cn
作者简介:郑仲华(1988-),男,福建泉州人,硕士生,助理工程师,研究方向:兽医微生物与免疫、兽药残留,E-mail:453630650@qq.com
基金资助:
广东省省级科技计划项目（2015B020230009）

Prokaryotic Expression of Truncated S Gene of Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus and Preliminary Test of Immunogenicity

ZHENG Zhong-hua¹, YANG Pei¹, ZHAO Ming¹, QIU Feng¹, WU Zu-qing¹, ZHANG Shi-yun¹, LIU Qiao-fan¹, HE Hong-zhou¹, HONG Chun-dan¹, WEI Chu-dan¹, ZHAO Shuang¹, LI Pan-pan¹, CHEN Jin-ding²

1. Nansha Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Guangzhou 511457, China;
2. College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China

Received:2016-03-31 Online:2016-10-20 Published:2016-10-28

摘要/Abstract

摘要：

为监测猪场猪群中猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）抗体水平，本研究利用TGEV冻存液，通过RT-PCR扩增得到S基因的主要抗原片段B/C区约560 bp，将其酶切后连接到pET-32a载体，转化大肠杆菌BL21感受态细胞。挑取转化成功的部分菌落进行PCR试验，将目的条带正确的菌落添加到LB培养基过夜培养，提取重组质粒并送测序。培养测序正确的菌液，利用IPTG诱导蛋白表达，通过SDS-PAGE试验，在约37 ku位置有一明显的目的条带。利用自制猪传染性胃肠炎兔血清通过Western blotting试验检测纯化的重组蛋白，在37 ku处可见一条带，表明此重组蛋白具有一定的免疫原性。本研究将有助于研究TGEV ELSIA检测试剂盒的组装并进行TGEV抗体水平的监测，为猪场免疫情况提供相应参考。

关键词: 猪传染性胃肠炎病毒; B/C区; 截短表达

Abstract:

To monitor TGEV antibody in pig,major antigenic fragments of TGE B/C zone was amplified by PCR,purified PCR product and pET-32a which were separately digested,and were connected and transformed into the BL21 competent cells.We picked out successfully transformed bacterial colonies to amplify by PCR,and put the remained bacterial colonies into LB solution to culture overnight,which was extracted to get recombinant plasmid and sequenced.We cultivated right sequenced bacteria to induce protein to express by IPTG,there was a right target band in 37 ku,which was purified by cutting polyacrylamide gel,then detected by Western blotting with homemade anti-rabbit serum,specific band (about 37 ku) could finally be seen in the right position,which proved that this recombinant protein was immunogenic.It would profitably create ELISA-kit to supervise TGEV antibody,and effectively provide some relevant value in immune situation of pig.

Key words: TGEV; B/C zone; truncated expression

中图分类号:

郑仲华, 杨佩, 赵明, 丘峰, 吴祖庆, 张仕云, 柳俏凡, 何洪洲, 洪纯丹, 魏楚丹, 赵爽, 李盼畔, 陈金顶. 猪传染性胃肠炎病毒截短S基因原核表达及免疫原性初步检测[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(10): 2541-2546.

ZHENG Zhong-hua, YANG Pei, ZHAO Ming, QIU Feng, WU Zu-qing, ZHANG Shi-yun, LIU Qiao-fan, HE Hong-zhou, HONG Chun-dan, WEI Chu-dan, ZHAO Shuang, LI Pan-pan, CHEN Jin-ding. Prokaryotic Expression of Truncated S Gene of Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus and Preliminary Test of Immunogenicity[J]. , 2016, 43(10): 2541-2546.

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猪传染性胃肠炎病毒截短S基因原核表达及免疫原性初步检测

Prokaryotic Expression of Truncated S Gene of Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus and Preliminary Test of Immunogenicity

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