猪流行性腹泻病毒部分N基因的原核表达及表达产物反应原性分析

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.011

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (3): 637-643.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.03.011

猪流行性腹泻病毒部分N基因的原核表达及表达产物反应原性分析

张博^1,2,3, 李守军^1,2,3, 吕茂杰^2,3, 杨保收^1,2,3

1. 天津农学院动物科学与动物医学学院, 天津 300384;
2. 农业部生物兽药创制重点实验室, 天津 300308;
3. 天津瑞普生物技术股份有限公司研究院, 天津 300308

收稿日期:2015-10-08 出版日期:2016-03-20 发布日期:2016-03-30
通讯作者: 杨保收 E-mail:bsyang@ringpu.com
作者简介:张博(1988-),男,天津人,硕士生,研究方向:兽医生物技术与疫苗,E-mail:2419156562@qq.com
基金资助:
瑞普生物研究院猪流行性腹泻疫苗专项基金项目

Prokaryotic Expression of Partial N Gene Fragment of Porcine Epidemic Diarrhea Virus and Reactionogenicity Analysis of the Expressed Protein

ZHANG Bo^1,2,3, LI Shou-jun^1,2,3, LV Mao-jie^2,3, YANG Bao-shou^1,2,3

1. College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China;
2. Key Laboratory of Biogenic Veterinary Drugs Innovation, Ministry of Agriculture, Tianjin 300308, China;
3. Ringpu Biological Research Institute, Tianjin 300308, China

Received:2015-10-08 Online:2016-03-20 Published:2016-03-30

摘要/Abstract

摘要： 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)部分N蛋白的原核表达产物是否具有抗原性,并为建立PEDV的间接ELISA方法奠定基础,本试验应用RT-PCR技术扩增N基因的部分核酸序列,经克隆后将目的片段连接到原核表达载体pET-30a(+)中。重组菌于37 ℃、0.5 mmol/L IPTG诱导4 h后进行SDS-PAGE分析,并进行Western blotting鉴定。结果显示,构建的原核表达重组质粒测序正确,且该蛋白与抗血清(PEDV高免血清)具有良好的反应活性。本试验成功构建了PEDV部分N基因原核表达载体,为后续PEDV感染的血清学诊断方法的建立提供依据。

关键词: 猪流行性腹泻病毒; N基因片段; 原核表达; 反应原性

Abstract: This experiment was aimed to study the antigenicity of prokaryotic expression of the N gene fragment of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV),and lay a foundation for establishing an indirect ELISA method of PEDV.The N gene segment was amplified by RT-PCR,then the recombinant plasmid with the vector pET-30a(+) was constructed,which was induced by 0.5 mmol/L IPTG at 37 ℃ for 4 h.Furthermore,the expressed product was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting.Sequencing results proved that recombinant plasmid was correctly constructed.The result showed that the PEDV polyclonal antibody could specifically bind to PEDV N protein,which indicated that the recombinant fusion protein had excellent immunogenicity.A prokaryotic expression vector for the fragment of N protein was successfully constructed in this study,which laid a foundation for the development of diagnosis of PEDV.

Key words: porcine epidemic diarrhea virus (PEDV); N gene fragment; prokaryotic expression; reactionogenicity

中图分类号:

S852.65

张博, 李守军, 吕茂杰, 杨保收. 猪流行性腹泻病毒部分N基因的原核表达及表达产物反应原性分析[J]. , 2016, 43(3): 637-643.

ZHANG Bo, LI Shou-jun, LV Mao-jie, YANG Bao-shou. Prokaryotic Expression of Partial N Gene Fragment of Porcine Epidemic Diarrhea Virus and Reactionogenicity Analysis of the Expressed Protein[J]. , 2016, 43(3): 637-643.

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猪流行性腹泻病毒部分N基因的原核表达及表达产物反应原性分析

Prokaryotic Expression of Partial N Gene Fragment of Porcine Epidemic Diarrhea Virus and Reactionogenicity Analysis of the Expressed Protein

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