犬α-干扰素蛋白在不同表达载体中的生物学活性比较

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.10.008

《中国畜牧兽医》 ›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (10): 2560-2565.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.10.008

犬α-干扰素蛋白在不同表达载体中的生物学活性比较

刘欢^1,2, 金红岩², 侯强², 史秋梅¹, 董瑞凯², 张通明², 侯绍华², 沈萍¹

1. 河北科技师范学院预防兽医实验室, 秦皇岛 066003;
2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

收稿日期:2016-02-22 出版日期:2016-10-20 发布日期:2016-10-28
通讯作者: 侯绍华, 沈萍 E-mail:houshaohua@126.com;shp5665@126.com
作者简介:刘欢(1990-),女,辽宁抚顺人,硕士,研究方向:动物病毒学及动物病毒病防控,E-mail:13521440852@163.com
基金资助:
公益性行业（农业）项目“宠物疫病快速诊断与疫苗研究与示范”（201303042）

The Comparison of Canine α-Interferon Antiviral Activity in Different Expression Vectors

LIU Huan^1,2, JIN Hong-yan², HOU Qiang², SHI Qiu-mei¹, DONG Rui-kai², ZHANG Tong-ming², HOU Shao-hua², SHEN Ping¹

1. Preventive Veterinary Laboratory of Hebei Normal University of Science and Technology, Qinhuangdao 066003, China;
2. Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China

Received:2016-02-22 Online:2016-10-20 Published:2016-10-28

摘要/Abstract

摘要：

根据GenBank中公布的犬α-干扰素（CaIFN-α）基因核酸序列，去掉信号肽后设计并合成1对引物，引入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点。以提取的犬肝脏DNA为模板，利用PCR技术扩增CaIFN-α基因，并分别克隆至表达载体pBV220、pET-32a（His标签）中，转化大肠杆菌BL21（DE3）原核表达系统。重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blotting鉴定。纯化目的蛋白，并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗病毒活性。试验结果表明，与pBV220载体连接的目的基因表达的蛋白活性较低，而与pET-32a（His标签）连接的目的基因表达的蛋白活性较高，达2.56×10⁶ U/mL。通过分析不同载体对IFN-α的表达情况，为生产高活性的IFN奠定基础。

关键词: 犬; α -干扰素; 原核表达; 生物学活性

Abstract:

According to the sequence of canine interferon-α (CaIFN-α) gene published in GenBank,primers were designed,synthesized and introduced EcoRⅠand HindⅢ restriction sites.Using canine liver DNA as a template,CaIFN-α gene was amplified by PCR,then the gene was cloned into pBV220 and pET-32a(+) expression vector,and transformed into the BL21(DE3) expression system.Recombinant fusion protein was analysed by SDS-PAGE and Western blotting.Protein was purified and the antiviral activity was detected by MDCK/VSV cytopathic inhibition assay.The results showed that pBV220-α-IFN recombinant protein has a low activity,but the activity of pET32a-α-IFN recombinant protein was up to 2.56×10⁶ U/mL.This study laid a foundation for production of highly active IFN.

Key words: canine; interferon-α; prokaryotic expression; antiviral activity

中图分类号:

刘欢, 金红岩, 侯强, 史秋梅, 董瑞凯, 张通明, 侯绍华, 沈萍. 犬α-干扰素蛋白在不同表达载体中的生物学活性比较[J]. 《中国畜牧兽医》, 2016, 43(10): 2560-2565.

LIU Huan, JIN Hong-yan, HOU Qiang, SHI Qiu-mei, DONG Rui-kai, ZHANG Tong-ming, HOU Shao-hua, SHEN Ping. The Comparison of Canine α-Interferon Antiviral Activity in Different Expression Vectors[J]. , 2016, 43(10): 2560-2565.

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犬α-干扰素蛋白在不同表达载体中的生物学活性比较

The Comparison of Canine α-Interferon Antiviral Activity in Different Expression Vectors

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