副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

doi:10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.01.009

›› 2016, Vol. 43 ›› Issue (1): 58-62.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.01.009

副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

李丹丹¹, 徐义刚², 王昱³, 邱索平⁴, 高会江⁵, 高慎阳⁶

1. 海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 海口 570311;
2. 东北农业大学动物医学院, 哈尔滨 150030;
3. 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 重庆 404100;
4. 从化出入境检验检疫局, 从化 510900;
5. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 牛遗传育种研究室, 北京 100193;
6. 辽宁医学院畜牧兽医学院, 锦州 121001

收稿日期:2015-08-10 出版日期:2016-01-20 发布日期:2016-01-23
通讯作者: 徐义刚 E-mail:esta123@126.com
作者简介:李丹丹(1979-),女,黑龙江哈尔滨人,博士,主要从事病原微生物诊断与防治技术研究,E-mail:108074182@qq.com
基金资助:
海南省社会发展科技专项(2015SF29);国家质检总局科技项目(2013IK031、2013IK051、2015IK089);重庆市科技计划项目(cstc2014yykfA80017);海南省应用技术研究与开发专项项目(ZDXM20130025)

Development of Real-time PCR Method for Rapid Detection of Vibrio parahaemolyticus

LI Dan-dan¹, XU Yi-gang², WANG Yu³, QIU Suo-ping⁴, GAO Hui-jiang⁵, GAO Shen-yang⁶

1. Inspection & Quarantine Technology Center of Hainan Entry-exit Inspection & Quarantine Bureau, Haikou 570311, China;
2. College of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;
3. Inspection & Quarantine Technology Center of Chongqing Entry-exit Inspection & Quarantine Bureau, Chongqing 404100, China;
4. Conghua Entry-exit Inspection & Quarantine Bureau, Conghua 510900, China;
5. Laboratory of Bovine Genetics and Breeding, Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China;
6. Department of Animal Husbandry & Veterinary Medicine, Liaoning Medical University, Jinzhou 121001, China

Received:2015-08-10 Online:2016-01-20 Published:2016-01-23

摘要/Abstract

摘要： 为建立检测副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的快速检测方法,本研究以VP toxR基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VP的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有VP检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为4.9 CFU/mL,利用该检测方法对采集的150份样品进行检测,共计检出3份VP阳性样品,与国标法(GB 4789.7-2013)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。

关键词: 副溶血弧菌; toxR基因; 实时荧光定量PCR

Abstract: To establish a rapid assay for detection of Vibrio parahaemolyticus(VP), Real-time PCR method was developed targeting to toxR gene of Vibrio parahaemolyticus.The results showed that the test for 15 bacteria strains using the Real-time PCR method, only Vibrio parahaemolyticus test was positive, indicating that the method had high specificity.In addition, the sensitivity of Real-time PCR was 4.9 CFU/mL.Furthermore, a total of 3 positive samples for Vibrio parahaemolyticus were detected from 150 clinical samples by the Real-time method, which was in accordance with the testing result by GB 4789.7-2013 standard detection protocol.Therefore, the Real-time method provided a novel rapid and sensitive detection method with good practicality for Vibrio parahaemolyticus infection.

Key words: Vibrio parahaemolyticus(VP); toxR gene; Real-time PCR

中图分类号:

李丹丹, 徐义刚, 王昱, 邱索平, 高会江, 高慎阳. 副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立[J]. , 2016, 43(1): 58-62.

LI Dan-dan, XU Yi-gang, WANG Yu, QIU Suo-ping, GAO Hui-jiang, GAO Shen-yang. Development of Real-time PCR Method for Rapid Detection of Vibrio parahaemolyticus[J]. , 2016, 43(1): 58-62.

参考文献

[1] 林强,李宁求,付小哲,等.牡蛎中副溶血弧菌荧光定量PCR检测方法的建立及其应用[J].中国水产科学,2011,18(1):96-102.
[2] 纪懿芳,胡文忠,姜爱丽,等.海产品中副溶血弧菌检测方法研究进展[J].食品工业科技,2015,36(5):365-369.
[3] Altekruse S F,Bishop R D,Baldy L M,et al. Vibrio gastroenteritis in the US Gulf of Mexico region:The role of raw Ostrea[J]. Epidemiol Infect,2000,124(3):489-495.
[4] 徐义刚,李丹丹,刘新亮,等.基于环介导等温扩增技术水产品中副溶血弧菌快速检测方法的建立与应用[J].中国兽医杂志,2013,49(10):68-71.
[5] 宫春波,王朝霞,刘磊,等.烟台市生食水产品中副溶血弧菌污染调查及风险评价[J].食品安全质量检测学报,2014,5(11):3758-3763.
[6] 段永翔,鞠长燕,刘李,等.2006-2008年深圳市食源性病例和外环境的副溶血性弧菌分离株分型特征比较[J].微生物学报,2011,51(4):518-523.
[7] Gooch J A,DePaola A,Kaysner C A,et al.Evaluation of two direct plating methods using nonradioactive probes for enumeration of Vibrio parahaemolyticus in oysters[J]. Appl Environ Microbiol,2001,67(2):721-724.
[8] 张晓君,梁利国,阎斌伦,等.基于toxR基因的SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测病原副溶血弧菌方法的建立[J].中国兽医学报,2012,32(2):543-547.
[9] 邵美丽,董鑫,赵燕丽,等.单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌双重荧光定量PCR检测方法建立[J].食品科学,2013,34(16):169-172.
[10] 李丹丹,徐义刚,王绥家,等.肠出血性大肠埃希菌O157:H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立[J].中国畜牧兽医,2014,41(7):81-84.
[11] 刘二龙,卢丽,唐婕,等.化脓隐秘杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].中国畜牧兽医,2015,42(5):1093-1097.
[12] Cai T,Jiang L,Yang C,et al.Application of Real-time PCR for quantitative detection of Vibrio parahaemolyticus from seafood in eastern China[J]. FEMS Immunol Med Microbiol,2006,46(2):180.
[13] 冯可,胡文忠,姜爱丽,等.单核细胞增生性李斯特菌分子生物学检测技术的研究进展[J].2014,35(4):392-396.
[14] 范斌,许文花,韩建强,等.猪瘟兔化弱毒疫苗中病毒含量实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J].中国畜牧兽医,2014,41(12):56-61.
[15] 倪梦丽,杨冰,王春德,等.贝类中副溶血弧菌和沙门氏菌荧光定量PCR快速检测方法的建立[J].中国动物检疫,2013,30(8):78-82.
[16] 冼钰茵,易敏英,魏霜,等.基于弧菌毒力基因多重PCR法的建立及其在副溶血弧菌毒力基因检测中的应用[J].现代食品科技,2015,31(7):309-315.

副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

Development of Real-time PCR Method for Rapid Detection of Vibrio parahaemolyticus

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[1]	麻宝艺, 盛陈艳, 刘宏莹, 马青霞, 汪婷婷, 李健明, 时坤, 杜锐, 冷雪. BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2326-2335.
[2]	吕晓楠, 徐立蒲, 张文, 王娜, 曹欢, 王小亮, 王姝, 王静波. 感染鲤浮肿病毒镜鲤的组织病理变化及病毒分布规律研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1077-1084.
[3]	张军芳, 孙建富, 孙斌, 唐琳, 王英, 王恩泽, 崔岩, 李强, 严昌国, 李香子. 延边牛PPARγ基因的克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 2695-2704.
[4]	苗曼宁, 郭益文, 胡德宝, 曾雨晗, 李新, 张林林, 丁向彬, 郭宏. MSTN基因编辑牛肌肉转录组测序及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(7): 2271-2281.
[5]	李恒, 字向东. 牦牛跨膜附睾蛋白1基因的克隆及其在卵丘卵母细胞复合体中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1284-1293.
[6]	李建梅, 季正剑, 刘梅, 沈欣悦, 程旭, 俞燕, 戴亚斌. 藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫后免疫相关基因的表达变化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1440-1448.
[7]	陈磊, 袁枫, 贺三刚, 玛依拉, 李文蓉. 绵羊FGF10基因克隆、序列分析及其在毛囊发育中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(2): 425-432.
[8]	戴政列, 朱静静, 陈振宇, 周晓龙, 汪涵, 李向臣, 赵阿勇, 杨松柏. 猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(12): 4382-4390.
[9]	姜懿轩, 王亚玲, 邢珊珊, 宋国华, 许会芬, 李明. 新西兰白兔MSTN基因克隆、生物信息学分析及表达谱构建[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3501-3511.
[10]	李志强, 陶晨雨, 魏奥龙, 贾青. 猪性控精子纯度实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3682-3690.
[11]	王征帆, 朱利塞, 王娟, 李祎云, 向蕊, 应碧云, 王贵平, 贾爱卿, 白挨泉. PDCoV与TGEV双重实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3855-3863.
[12]	李安奇, 蒋蕾, 苏晓彤, 昝林森, 王洪宝. 秦川牛ACTC1基因的表达特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(8): 2359-2367.
[13]	李京徽, 邢思远, 王希彩, 李庆贺, 赵桂苹, 张永宏, 文杰, 刘冉冉. 鸡肌内脂肪沉积相关候选基因筛选[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(6): 1828-1836.
[14]	姜徽, 刘攀, 李媛媛, 刘奎国, 黄锡霞, 刘江卫, 胥磊, 杜建文, 桑扎根, 杨雪梅, 赵番番, 王丹. 新疆褐牛乳房炎抗性相关基因的表达及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(1): 90-97.
[15]	张继, 易鸣, 程朝友, 程均华, 付正仙, 杨德文, 吴雪, 邱淦远, 刘若余. 威宁绵羊SOCS7和GFAP基因组织表达研究[J]. 《中国畜牧兽医》, 2019, 46(7): 1899-1906.