基于TaqMan探针的虎制品实时荧光定量PCR的特异性鉴定

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (2): 40-42.

基于TaqMan探针的虎制品实时荧光定量PCR的特异性鉴定

张太翔¹, 凌宗帅², 赵立娜¹, 袁涛³, 徐彪³, 梁成珠³, 刘文鹏¹, 孙军¹, 张艺兵¹

1. 潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊 261041;2. 济南出入境检验检疫局,山东济南 250014;3. 山东检验检疫局,山东青岛 250023

收稿日期:1900-01-01 修回日期:2011-08-01 出版日期:2012-02-20 发布日期:2012-02-20

Real-time Quantitative RT-PCR Assay for Specific Identification of Panthera tigris Materials

ZHANG Tai-xiang¹, LING Zong-shuai², ZHAO Li-na¹, YUAN Tao³, XU Biao³, LIANG Cheng-zhu³, LIU Wen-peng¹, SUN Jun¹, ZHANG Yi-bing¹

1. Weifang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of People's Republic of China, Weifang 261041, China;2. Jinan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of People's Republic of China, Jinan 250014, China;3. Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of People's Republic of China,Qingdao 250023, China

Received:1900-01-01 Revised:2011-08-01 Online:2012-02-20 Published:2012-02-20

摘要/Abstract

摘要： 根据虎线粒体细胞色素b核苷酸保守序列设计引物和探针,建立了一种快速鉴定虎制品的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,5.0×10⁵~ 5.0×10¹拷贝/μL范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝/μL。对豹、狮子、猫等7种非虎哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性和重复性好、方便经济的特性,在虎制品的检测与鉴定中具有良好的应用前景。

关键词: 虎; 实时荧光定量PCR; TaqMan探针

Abstract: Primers and probes were designed based on the conservative sequence of cytochondriome cytochrome b, a real-time quan quantitative RT-PCR assay was developed for indentification of Panthera tigris. The recombinant plasmid containing the target sequence was constructed to detect the sensitivity and prepare the standard curve. The real-time RT-PCR assay had a detection limit of 50 copies/μL, and with a dynamic range of detection between 5×10⁵to 5×10¹ copies /μL. The primers and probe were specific for Panthera tigris' DNA and did not react with other non- Panthera tigris' DNA. This real-time RT-PCR assay with high sensitivity, specificity and accuracy is considered to be a powerful tool for the rapid indentification and quantification of Panthera tigris.

Key words: Panthera tigris; real-time quantitative RT-PCR; TaqMan probe

中图分类号:

S879.1

张太翔;凌宗帅;赵立娜;袁涛;徐彪;梁成珠;刘文鹏;孙军;张艺兵. 基于TaqMan探针的虎制品实时荧光定量PCR的特异性鉴定[J]. , 2012, 39(2): 40-42.

ZHANG Tai-xiang;LING Zong-shuai;ZHAO Li-na;YUAN Tao;XU Biao;LIANG Cheng-zhu;LIU Wen-peng;SUN Jun;ZHANG Yi-bing. Real-time Quantitative RT-PCR Assay for Specific Identification of Panthera tigris Materials[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2012, 39(2): 40-42.

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