基于TaqMan探针的虎制品实时荧光定量PCR的特异性鉴定

›› 2012, Vol. 39 ›› Issue (2): 40-42.

基于TaqMan探针的虎制品实时荧光定量PCR的特异性鉴定

张太翔¹, 凌宗帅², 赵立娜¹, 袁涛³, 徐彪³, 梁成珠³, 刘文鹏¹, 孙军¹, 张艺兵¹

1. 潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊 261041;2. 济南出入境检验检疫局,山东济南 250014;3. 山东检验检疫局,山东青岛 250023

收稿日期:1900-01-01 修回日期:2011-08-01 出版日期:2012-02-20 发布日期:2012-02-20

Real-time Quantitative RT-PCR Assay for Specific Identification of Panthera tigris Materials

ZHANG Tai-xiang¹, LING Zong-shuai², ZHAO Li-na¹, YUAN Tao³, XU Biao³, LIANG Cheng-zhu³, LIU Wen-peng¹, SUN Jun¹, ZHANG Yi-bing¹

1. Weifang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of People's Republic of China, Weifang 261041, China;2. Jinan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of People's Republic of China, Jinan 250014, China;3. Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of People's Republic of China,Qingdao 250023, China

Received:1900-01-01 Revised:2011-08-01 Online:2012-02-20 Published:2012-02-20

摘要/Abstract

摘要： 根据虎线粒体细胞色素b核苷酸保守序列设计引物和探针,建立了一种快速鉴定虎制品的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,5.0×10⁵~ 5.0×10¹拷贝/μL范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝/μL。对豹、狮子、猫等7种非虎哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性和重复性好、方便经济的特性,在虎制品的检测与鉴定中具有良好的应用前景。

关键词: 虎; 实时荧光定量PCR; TaqMan探针

Abstract: Primers and probes were designed based on the conservative sequence of cytochondriome cytochrome b, a real-time quan quantitative RT-PCR assay was developed for indentification of Panthera tigris. The recombinant plasmid containing the target sequence was constructed to detect the sensitivity and prepare the standard curve. The real-time RT-PCR assay had a detection limit of 50 copies/μL, and with a dynamic range of detection between 5×10⁵to 5×10¹ copies /μL. The primers and probe were specific for Panthera tigris' DNA and did not react with other non- Panthera tigris' DNA. This real-time RT-PCR assay with high sensitivity, specificity and accuracy is considered to be a powerful tool for the rapid indentification and quantification of Panthera tigris.

Key words: Panthera tigris; real-time quantitative RT-PCR; TaqMan probe

中图分类号:

S879.1

张太翔;凌宗帅;赵立娜;袁涛;徐彪;梁成珠;刘文鹏;孙军;张艺兵. 基于TaqMan探针的虎制品实时荧光定量PCR的特异性鉴定[J]. , 2012, 39(2): 40-42.

ZHANG Tai-xiang;LING Zong-shuai;ZHAO Li-na;YUAN Tao;XU Biao;LIANG Cheng-zhu;LIU Wen-peng;SUN Jun;ZHANG Yi-bing. Real-time Quantitative RT-PCR Assay for Specific Identification of Panthera tigris Materials[J]. , 2012, 39(2): 40-42.

[1]	胡依凡, 马敬华, 白思琦, 翟祎梦, 刘建勋, 宋厚辉, 杨永春. 华南虎子宫内膜炎摩氏摩根菌分离鉴定及生物学特性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2023, 50(3): 1271-1278.
[2]	麻宝艺, 盛陈艳, 刘宏莹, 马青霞, 汪婷婷, 李健明, 时坤, 杜锐, 冷雪. BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(6): 2326-2335.
[3]	吕晓楠, 徐立蒲, 张文, 王娜, 曹欢, 王小亮, 王姝, 王静波. 感染鲤浮肿病毒镜鲤的组织病理变化及病毒分布规律研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(3): 1077-1084.
[4]	孙璐, 张静, 尹苗, 程耀蝶, 代锟, 吴倩, 赵洪, 陈希文. 4种清热解毒复方中草药体外抑菌及抗PRRSV活性研究[J]. 中国畜牧兽医, 2022, 49(2): 746-754.
[5]	张军芳, 孙建富, 孙斌, 唐琳, 王英, 王恩泽, 崔岩, 李强, 严昌国, 李香子. 延边牛PPARγ基因的克隆及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(8): 2695-2704.
[6]	苗曼宁, 郭益文, 胡德宝, 曾雨晗, 李新, 张林林, 丁向彬, 郭宏. MSTN基因编辑牛肌肉转录组测序及生物信息学分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(7): 2271-2281.
[7]	李恒, 字向东. 牦牛跨膜附睾蛋白1基因的克隆及其在卵丘卵母细胞复合体中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1284-1293.
[8]	李建梅, 季正剑, 刘梅, 沈欣悦, 程旭, 俞燕, 戴亚斌. 藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫后免疫相关基因的表达变化分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(4): 1440-1448.
[9]	陈磊, 袁枫, 贺三刚, 玛依拉, 李文蓉. 绵羊FGF10基因克隆、序列分析及其在毛囊发育中的表达分析[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(2): 425-432.
[10]	戴政列, 朱静静, 陈振宇, 周晓龙, 汪涵, 李向臣, 赵阿勇, 杨松柏. 猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(12): 4382-4390.
[11]	姜懿轩, 王亚玲, 邢珊珊, 宋国华, 许会芬, 李明. 新西兰白兔MSTN基因克隆、生物信息学分析及表达谱构建[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3501-3511.
[12]	李志强, 陶晨雨, 魏奥龙, 贾青. 猪性控精子纯度实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3682-3690.
[13]	王征帆, 朱利塞, 王娟, 李祎云, 向蕊, 应碧云, 王贵平, 贾爱卿, 白挨泉. PDCoV与TGEV双重实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(10): 3855-3863.
[14]	翟俊琼, 吴亚江, 代军威, 陈安妮, 周妞, 王晨, 杜雪晴, 罗满林, 陈武. 东北虎γ-干扰素基因的克隆、生物信息学分析及其在毕赤酵母中的表达[J]. 中国畜牧兽医, 2021, 48(1): 72-82.
[15]	李安奇, 蒋蕾, 苏晓彤, 昝林森, 王洪宝. 秦川牛ACTC1基因的表达特性分析[J]. 中国畜牧兽医, 2020, 47(8): 2359-2367.