猪传染性胃肠炎病毒S基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

中国畜牧兽医

猪传染性胃肠炎病毒S基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

王建中

（滨州市科学技术情报研究所，山东滨州 256606)

出版日期:2014-01-20 发布日期:2014-02-27
作者简介:王建中（1975—），男，山东人，学士，副研究员，研究方向：生物信息。
基金资助:
山东省自主创新成果转化重大专项(2010ZHZX1A0417)。

Development of SYBR Green Ⅰ Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Transmissible Gastroenteritis Virus of Swine S Gene

WANG Jian-zhong

(Binzhou Science and Technology Information Institute,Binzhou 256606,China)

Online:2014-01-20 Published:2014-02-27

摘要/Abstract

摘要： 据猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV）S基因序列设计1对特异性引物,通过对实时荧光定量RT-PCR反应条件的优化，建立了SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法，同时对12份病料进行检测，并与常规RT-PCR进行比较。结果显示，该方法的敏感性达到43.07拷贝/μL，具有良好的特异性和重复性，而常规RT-PCR最低只检测到4.307×10³ 拷贝/μL，敏感性较低。本试验建立的检测TGEV S基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法为传染性胃肠炎的鉴别诊断及TGEV的分离鉴定奠定了技术基础。

关键词: 猪流行性腹泻病毒; S基因; SYBR Green Ⅰ; 实时荧光定量RT-PCR; 标准曲线

Abstract: The primers were designed and synthesized according to the sequences of S gene of transmissible gastroenteritis virus （TGEV）, and then reaction requirements were optimized to develop a SYBR Green Ⅰ fluorescence quantitative RT-PCR assay. Meanwhile, 12 field samples were detected and the results were compared with that of routine RT-PCR. It was showed that the fluorescence quantitative RT-PCR assay could detect 43.07 copies/μL of plasmid DNA and its specificity and reproducibility were very good, while the sensitivity of the routine RT-PCR was 4.307×10³ copies/μL.The results of field test also showed that its sensitivity was higher than that of routine RT-PCR. The SYBR Green Ⅰ fluorescent quantitative RT-PCR assay for detecting S gene of TGEV was developed for the basis of early， rapid detection and quantitative analysis of the infection intensity of TGEV in this experiment.

Key words: transmissible gastroenteritis virus of swine; S gene; SYBR-Green Ⅰ; fluorescence quantitative RT-PCR; standard curve

王建中. 猪传染性胃肠炎病毒S基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 中国畜牧兽医.

WANG Jian-zhong. Development of SYBR Green Ⅰ Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Detection of Transmissible Gastroenteritis Virus of Swine S Gene[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine.

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